鴨瘟病毒PCR檢測試劑盒

【產品名稱】

通用名稱：鴨瘟病毒檢測試劑盒（實時熒光PCR法）

英文名稱：Duck Plague virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規(guī)格】 25T /盒 ＆ 50T /盒

【預期用途】

鴨瘟（Duck Plague，DP）又名鴨病毒性腸炎（DVE）是鴨、鵝、天鵝的一種急性、熱性、敗血性傳染病，本試劑盒利用實時熒光PCR原理，主要用于鴨瘟病毒的定性篩查檢測及療效評估有重要指導意義.

【檢驗原理】

本試劑盒針對DPV高度保守區(qū)域設計特異性引物和探針，在反應體系中含DPV基因組模板的情況下，PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用儀器對PCR過程中相應通道的信號強度進行實時監(jiān)測和輸出，實現(xiàn)檢測結果的定性分析。

【主要組成成份】

注：陰性對照為鴨基因組DNA，陽性對照為DPV經滅活處理的核酸提取物。

【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反復凍融，有效期12個月。

【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀。

【樣本要求】

1. 患病動物的腦、肝、胰、肺、腎、扁桃體等病理組織。

2. 標本收集后若不能立即檢測，可置于2～8℃冷藏過夜保存；如需長期保存，標本應凍存于-20℃～-80℃。

3. 標本保存期間應避免反復凍融。

【檢驗方法】

1. 試劑準備（試劑準備區(qū)）

（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑，充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。

（2）核算當次實驗所需要的反應數(shù)（n），并根據(jù)如下表所示反應體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。

n =陰性對照數(shù)（1T）+陽性對照數(shù)（1T）+誤差預留量（1T）+樣本數(shù)

(3)在無菌離心管中加入上述試劑，充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應管。

(4)蓋緊PCR反應管蓋后將PCR反應管轉移至樣本處理區(qū)。剩余試劑放回-20℃以下冰箱冷凍保存。

2.樣本準備（樣本處理區(qū)）

用QIAGEN、Roche公司DNA提取試劑盒提取DNA，具體操作按照其試劑盒說明書操作。

3.加樣

在上述制備好的PCR反應樣本管中分別加入處理好的待測標本DNA各5μl、終體積25μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品，終體積為25μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉移到PCR儀器上。

4.PCR（PCR擴增區(qū)）

（1）取樣本處理區(qū)準備好的PCR反應管，放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應位置，并記錄放置順序。

（2）按下表設置儀器核酸擴增相關參數(shù)進行PCR擴增。

注：ABI系列熒光PCR儀在設置時不選ROX校正，設置淬滅基團選擇None。

【參考值（參考范圍）】

1.試劑盒有效性判定：

（1）陽性對照：有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。

（2）陰性對照：Ct值＞38或無Ct值，線形為直線或輕微斜線，無指數(shù)增長期。

2.標本結果判定：

（1）陽性：標本檢測結果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。

（2）可疑：標本檢測結果Ct值在35～38范圍內。此時應對標本進行重復檢測，如重復實驗結果Ct值仍在35～38范圍內，有明顯指數(shù)增長期，則判定為陽性，否則為陰性。

（3）陰性：標本檢測結果Ct值＞38或無Ct值。

【檢驗結果的解釋】

【檢驗方法的局限性】

1.當檢測樣本中被檢核酸濃度含量低于本試劑盒的低檢出*可能會發(fā)生假陰性的結果。

2.本試劑盒僅供標本初步篩查使用，對于本試劑盒檢測陽性結果應進一步使用培養(yǎng)法進行確診。

【產品性能指標】 產品的低檢出限為10²CFU，產品CV值≤5%。

【注意事項】

1.整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器、耗材應獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。

2.每次實驗應該設置陰、陽性對照。

3.為保證試劑不受標本污染，必須將混合酶液及PCR反應液保存于試劑準備區(qū)。

4.試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心。

5.試劑盒內所配陰性和陽性對照在di一次使用前應全部轉移至標本準備區(qū)，并單獨存放。

6.為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記。

7.儀器擴增相關參數(shù)應按照本說明書相關要求進行設置；不同批號試劑不能混用。

8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。

9.實驗過程中產品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。