Immunetech的重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存方法,原核細胞表達的重組蛋白為凍干粉狀況,真核細胞表達的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在-80℃條件下可保存數(shù)年。
凍干粉在運用前需進行溶解,其間溶解的辦法非常要害,因為溶解不好會降低蛋白的功效。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋運用過程中也需求細心留意,這些都是用戶在實踐應(yīng)用中經(jīng)常遇到的問題。
(1)重組蛋白的保護劑。
在凍干和貯存過程中常用的保護劑或穩(wěn)定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。咱們通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖和甘露醇作為凍干保護劑。海藻糖可顯著阻撓蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)改動以及凍干過程中蛋白質(zhì)的擴展和集合,甘露醇也是一種遍及應(yīng)用的凍干保護劑和填充劑。
(2)原核細胞表達的重組蛋白。
Immunetech大腸桿菌表達的凍干重組蛋白,現(xiàn)已從容納體中提純,添加了蛋白保護劑,運用過濾后的無菌水作為復(fù)溶劑即可,復(fù)溶凍干蛋白100μg,用86μl的超純水,悄悄搖晃使蛋白溶解。再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可*溶解,必定不能運用渦旋儀進行快速振蕩或劇烈搖晃。
(3)真核細胞表達的重組蛋白。
有活性的蛋白質(zhì)不只需轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方法保持正常,所以重組蛋白必須在真核細胞中進行,如哺乳動物細胞能夠辨認和去除基因中的內(nèi)含子,對翻譯后的蛋白質(zhì)進行加工。這樣表達的蛋白質(zhì)具有生物活性。咱們用溶液態(tài)來保存,保持了其杰出的活性和穩(wěn)定性。
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