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?您知道幾種檢測細胞凋亡的三種常用方法?

來源:研域生物技術(上海)有限公司   2020年02月27日 15:36  

一、形態(tài)學調(diào)查方法
1、HE染色、光鏡調(diào)查:凋亡細胞呈圓形,胞核深染,胞質(zhì)濃縮,染色質(zhì)成團塊狀,細胞外表有“出芽”現(xiàn)象。
2、丫啶橙(AO)染色,熒光顯微鏡調(diào)查:醫(yī)學教/育網(wǎng)搜集整理活細胞核呈黃綠色熒光,胞質(zhì)呈紅色熒光。凋亡細胞核染色質(zhì)呈黃綠色濃聚在核膜內(nèi)側,可見細胞膜呈泡狀膨出及凋亡小體。
3、臺盼藍染色:假如細胞膜不完整、破裂,臺盼藍染料進入細胞,細胞變藍,即為壞死。假如細胞膜完整,細胞不為臺盼藍染色,則為正常細胞或凋亡細胞。此方法對反映細胞膜的完整性,區(qū)別壞死細胞有必定的協(xié)助。
4、透射電鏡調(diào)查:可見凋亡細胞外表微絨毛消失,核染色質(zhì)固縮、邊集,常呈新月形,核膜皺褶,胞質(zhì)緊實,細胞器會集,胞膜起泡或出“芽”及凋亡小體和凋亡小體被接近巨噬細胞吞噬現(xiàn)象。
二、DNA凝膠電泳
1、檢測原理
細胞發(fā)作凋亡或壞死,其細胞DNA均發(fā)作開裂,細胞內(nèi)小分子量DNA的片斷添加,高分子DNA削減,胞質(zhì)內(nèi)呈現(xiàn)DNA的片斷。但凋亡細胞DNA開裂點均有規(guī)律的發(fā)作在核小體之間,呈現(xiàn)180-200bpDNA的片斷,而壞死細胞的DNA開裂點為無特征的雜亂片斷,使用此特征能夠確認集體細胞的逝shi,并可與壞死細胞區(qū)別。
2、結果判斷
正常活細胞DNA 電泳呈現(xiàn)階梯狀(LADDER)條帶;壞死細胞DNA電泳類似血抹片時的連續(xù)性條帶。
三、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)核小體測定
凋亡細胞的DNA開裂使細胞質(zhì)內(nèi)呈現(xiàn)核小體。核小體由組蛋白及其伴隨的DNA的片斷組成,可由ELISA法檢測。
2、用途
該法敏感性高,可檢測5*100/ml凋亡細胞??捎糜谌恕⒋笫?、小鼠的凋亡檢測。該法不需要特別儀器,適合基層工作,但是不能測定凋亡細胞發(fā)作的絕多對量。
 

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