原代細胞的培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng) 是從供體取得組織細胞在體外進行的*培養(yǎng)，是建立細胞系的一步，是一項基本技術(shù)。原代細胞因剛從組織中分離開，生物學(xué)特性未發(fā)生很大變化，仍保留原來的遺傳特性，也接近和反映體內(nèi)生長特性，適宜用于藥物敏感性試驗、細胞分化等實驗研究。

原代細胞往往有多種細胞組成，比較混雜，即使從形態(tài)上為同一類型（上皮樣或成纖維樣），但細胞間仍有很大差異。如果供體不同，即使組織類型、部位相同，個體差異也照樣存在，原代細胞生物特性尚不穩(wěn)定，如需做較為嚴(yán)格的對比性實驗研究，還需進行短期傳代培養(yǎng)。

1、組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法，也是早期采用培養(yǎng)細胞的方法，故原先被稱為組織培養(yǎng)。

其方法：為將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶（或皿）中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長，方法簡便，利于培養(yǎng)，部分種類的組織細胞在小塊貼壁24小時后細胞就從組織塊四周游出。

然后逐漸延伸，長成肉眼可以觀察到的生長暈，5~7天后組織塊中央的組織細胞逐漸壞死脫落和發(fā)生漂浮，此漂浮小塊可隨換液而棄去，由組織塊周圍延伸的貼壁細胞也逐漸形成層片，可在顯微鏡下觀察形態(tài)和用于實驗研究。

其培養(yǎng)方法如下：

(1) 按照前述方法取材，將組織剪成或切成1mm3大小的小塊，并加入少許培養(yǎng)基使組織濕潤。

(2) 將小塊均勻涂布于瓶壁，每小塊間距0.2 cm~0.5cm，一般在25mL培養(yǎng)瓶(底面積為17.5cm2)可接種20～30小塊為宜,小塊放置后,輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,使瓶底朝上,然后于瓶內(nèi)加入適量培養(yǎng)基蓋好瓶塞,將瓶傾斜放置在37℃溫箱內(nèi)。

(3) 培養(yǎng)2~4小時，待小塊貼附后，將培養(yǎng)瓶緩慢翻轉(zhuǎn)平放，靜置培養(yǎng)，動作要輕，嚴(yán)禁搖動和來回振蕩，以防由于沖動而使小塊漂起而造成培養(yǎng)失敗，若組織塊不易貼壁可預(yù)先在瓶壁涂一薄層血清、胎汁或鼠尾膠原等。

開始培養(yǎng)時培養(yǎng)基不宜多，以保持組織塊濕潤即可，培養(yǎng)24小時后再補液，培養(yǎng)初期移動和觀察時要輕拿輕放，開始幾天盡量不去搬動，以利貼壁和生長，培養(yǎng)3~5天時可換液，一方面補充營養(yǎng)，一方面去除代謝產(chǎn)物和漂浮小塊所產(chǎn)生的毒性作用。

2. 消化培養(yǎng)法

該方法是采用前述的消化分散法，將妨礙細胞生長的細胞間質(zhì)（包括基質(zhì)、纖維等）去除，使細胞分散形成細胞懸液，然后分瓶培養(yǎng)。

某些特殊類型細胞，如內(nèi)皮細胞、骨細胞等的消化手段和步驟，將在有關(guān)章節(jié)中敘述。

3. 懸浮細胞培養(yǎng)法

對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞。