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超氧化物歧化酶試劑盒的檢測(cè)意義

來源:上海哈靈生物科技有限公司   2020年02月20日 15:16  

超氧化物歧化酶試劑盒
測(cè)定意義:
SOD(EC 1.15.1.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化超氧化物陰離子 發(fā)生岐化作用,生成 H2O2 和 O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是 H2O2 主要生成 酶,在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。
測(cè)定原理:
通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2-.),O2-.可還原氮藍(lán)四唑生成藍(lán)色甲臜,后者在 560nm 處有吸收;SOD 可清除 O2-.,從而抑制了甲臜的形成;反應(yīng)液藍(lán)色越深, 說明 SOD 活性愈低,反之活性越高。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑的組成和配制:
提取液:60mL×1 瓶,4℃保存; 
試劑一:15mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存,用時(shí)加入27ml蒸餾水,充分搖勻懸濁液;
試劑三:液體 175μL×1 支,4℃保存;(與蒸餾水1:1稀釋后再使用)
試劑四:液體 10mL×1 瓶,4℃保存。
粗酶液提?。?br />1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備: 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織, 加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
3、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。

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