化學(xué)發(fā)光指在氧化過程中,有一中間產(chǎn)物或終末產(chǎn)物,因能吸收能量而處于激發(fā)狀態(tài),并以化學(xué)發(fā)光的形式放出能量。化學(xué)發(fā)光免疫分析的基本原理是將發(fā)光劑的衍生物加到免疫反應(yīng)體系中,取代放射性同位素、酶、熒光等標(biāo)記物,zui后通過某種儀器測量反應(yīng)過程中產(chǎn)生光子的多寡,從而推算被測物質(zhì)的量。
ECL一般采用Ru(bpy)2+3、TPA作為氧化還原劑。加強的免疫電化學(xué)發(fā)光技術(shù)(1ECL)用于細(xì)菌的檢測。與常規(guī)夾心免疫方法不同的是,該法采用直接的夾心免疫;與常規(guī)化學(xué)發(fā)光及熒光技術(shù)相比,其主要優(yōu)點是信噪比高,發(fā)光信號易控制。典型的ECL反應(yīng)中,甚至在生物樣品存在時,因無熒光激活過程也沒有熒光干擾,且電動勢易控制相關(guān)ECL光子強度,與反應(yīng)時間和探針濃度無關(guān)。但也存在順磁珠非特異性吸附及某些化學(xué)物質(zhì)干擾化學(xué)反應(yīng)造成假陽性的現(xiàn)象。
Gatto Menking等報道用ECL檢測炭疽芽孢桿菌,敏感性達(dá)100個/ml;IECL具有高度重現(xiàn)性,對液相中可溶性抗原、核酸有檢測能力。但其影響因素多,且還有好多影響因素目前尚不清楚i抗體的生物素化、磁珠的選擇使得非特異結(jié)合降低。改進(jìn)的IECI。與常規(guī)IECL相比,敏感性增加了10倍。加強的IECL采用直接夾心免疫法檢測,選用一種親和力常數(shù)zui高的抗體進(jìn)行*免疫反應(yīng),敏感性達(dá)10個/ml。
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