手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號(hào)：chem17
掃碼關(guān)注視頻號(hào)
一文看懂細(xì)胞株構(gòu)建的原理
動(dòng)物細(xì)胞是生產(chǎn)治療性重組蛋白的強(qiáng)有力工具。為與小分子藥物區(qū)別開(kāi)來(lái)，治療性蛋白、疫苗以及細(xì)胞治療產(chǎn)品統(tǒng)稱(chēng)為生物制品。宿主細(xì)胞的選擇和改造對(duì)于提高產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量來(lái)說(shuō)至關(guān)重要。因此必須對(duì)細(xì)胞進(jìn)行篩選，選出具有高表達(dá)量和良好生長(zhǎng)特性的細(xì)胞。在此我們主要討論適用于大規(guī)模生產(chǎn)重組蛋白的細(xì)胞株的篩選。
工業(yè)上重組蛋白的制備主要有兩種方式：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染經(jīng)常用于制備少量蛋白（多達(dá)克級(jí)）用于藥物開(kāi)發(fā)早期的蛋白活性或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染并不產(chǎn)生克隆細(xì)胞株，它只是暫時(shí)將編碼外源蛋白的質(zhì)粒轉(zhuǎn)導(dǎo)入已有的細(xì)胞株里面（比如HEK293或COS細(xì)胞）。隨著細(xì)胞的分裂外源基因不斷丟失，蛋白產(chǎn)量較低，一般在1-100mg/L。近年來(lái)有報(bào)道稱(chēng)HEK293細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)量可達(dá)1g/L。
與瞬時(shí)轉(zhuǎn)染不同，穩(wěn)定細(xì)胞株是為工業(yè)化生產(chǎn)治療性蛋白而構(gòu)建的。穩(wěn)定細(xì)胞株需要具備在不同的時(shí)間，不同的場(chǎng)地以及不同的批次間生產(chǎn)相同質(zhì)量產(chǎn)品的能力。在選定生產(chǎn)用細(xì)胞株之后，需要建立主細(xì)胞庫(kù)（mater cell bank）。從主細(xì)胞庫(kù)復(fù)蘇后，擴(kuò)增建立工作細(xì)胞庫(kù)（working cell bank），工作細(xì)胞庫(kù)用于生產(chǎn)。細(xì)胞庫(kù)通常保存在液氮中，需要維持整個(gè)產(chǎn)品的生命周期。在構(gòu)建生產(chǎn)用細(xì)胞株的過(guò)程中，宿主細(xì)胞和表達(dá)載體至關(guān)重要。
穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建---高產(chǎn)細(xì)胞株的秘密
CHO和骨髓瘤細(xì)胞是構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株常用的兩種宿主細(xì)胞?；旧嫌眠@兩類(lèi)細(xì)胞生產(chǎn)的治療性蛋白都能分泌到細(xì)胞外，從而可以從細(xì)胞培養(yǎng)液中收獲產(chǎn)物。CHO細(xì)胞屬于成纖維細(xì)胞，是一種非分泌型細(xì)胞，它本身很少分泌內(nèi)源蛋白。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類(lèi)作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購(gòu)中心