背景介紹

酶聯(lián)免疫分析技術(shù)（ELISA）廣泛應(yīng)用于抗原、半抗原或抗體的定量或定性分析，辣根過氧化物酶（HRP）是 ELISA 技術(shù)常用的一種酶，能催化底物如 3,3'5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）發(fā)生顯色反應(yīng)，從而進(jìn)行定量或定性分析。

由于 TMB 比其他顯色底物具有更高的靈敏度且無致癌性、故而被廣泛使用，TMB 主要應(yīng)用于 ELISA、WB、免疫斑點(diǎn)雜交或免疫組化等實(shí)驗(yàn)，也有報(bào)道將其用于氯的檢測(cè)分析等。

TMB工作原理

HRP 或其他適當(dāng)過氧化物酶能催化TMB生成可溶的藍(lán)色產(chǎn)物， 此時(shí)通?？稍?nbsp;370nm 測(cè)定吸光度。當(dāng)顯色反應(yīng)被酸性溶液（如 0.5-2M H2SO4，0.5M HCl，1M H3PO4）終止后，產(chǎn)物由藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色，此時(shí)可在 450nm 測(cè)定吸光度。

傳統(tǒng)TMB顯色液（雙組分）

通常 TMB 顯色試劑以雙組分（A/B液）的形式提供，分別含H2O2和TMB，需要在使用前按1:1比例配制，具有以下缺點(diǎn)：

▲較容易產(chǎn)生沉淀；
▲使用起來相對(duì)不便；
▲較易導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果誤差。

愛必信單組分TMB顯色液優(yōu)勢(shì)

作為高品質(zhì)生命科學(xué)產(chǎn)品的中國(guó)品牌，愛必信生物研發(fā)推出的abs9178 單組分TMB顯色液，顯色試劑由單一溶液組成，有效簡(jiǎn)化了操作步驟，并且檢測(cè)結(jié)果更加穩(wěn)定可靠。其具有以下優(yōu)勢(shì)：

▲即用型溶液，含H2O2和TMB，單組分溶液形式，無需混合，方便快捷減少誤差；
▲檢測(cè)靈敏度高，線性濃度范圍寬；
▲含優(yōu)化的穩(wěn)定劑，2-8℃避光保存，有效期24個(gè)月以上；
▲低背景，質(zhì)量穩(wěn)定，批間差異小。

使用方法

▲使用之前，取出適量單組分 TMB 顯色液，使其恢復(fù)到室溫再開始使用；▲
▲參考 ELISA 檢測(cè)試劑盒的實(shí)驗(yàn)步驟，當(dāng)與 HRP 標(biāo)記抗體孵育一段時(shí)間后，用適當(dāng)洗滌液洗滌 3-5 次， 每次 3-5min；
▲洗滌完畢后，去除洗滌液，加入 100μl 單組分 TMB 顯色液；
▲室溫避光孵育 5-30min 或更長(zhǎng)時(shí)間（可長(zhǎng)達(dá) 24h），直至顯色到預(yù)期深淺?！咀⒁狻浚航ㄗh根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇比較佳試劑用量、顯色時(shí)間和反應(yīng)溫度；
▲直接在 370nm 測(cè)定吸光度?；蛘呒尤?nbsp;100μl 0.5-2M H2SO4 終止反應(yīng)，隨后在 450nm 測(cè)定吸光度。

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