細胞免疫熒光實驗步驟
1. 細胞一定要貼在玻片上(可以放入24孔板),為后面照像打基礎。細胞密度適中,大約60-75%滿片即可,否則容易脫片。
2. 取出細胞后用4%多聚甲醛固定15分鐘,現用現配。(以下各步驟切毋使玻片干燥)
3. PBS沖洗
4. 0.1%Triton作用20分鐘
5. PBS沖洗
6. 10%正常血清封閉10分鐘
7. 加入一抗,4度孵育過夜(找個小瓶蓋將小玻片支起來,抗體就不容易溢出),還要記住“砸片”,就是抗體從較高處落到片子上,以分布均勻??贵w稀釋度1:60,較常用!
8. PBS沖洗4次,各5分鐘
9加入熒光二抗,室溫30分鐘。抗體稀釋度1:400,較常用!
10. 同8。
11. 90%甘油封片。也很關鍵阿,多封幾次才有體會。
12. 避光保存,或到顯微鏡下觀察。
相關產品
免責聲明
- 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內與本網聯(lián)系,否則視為放棄相關權利。