手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號(hào)：chem17
掃碼關(guān)注視頻號(hào)
實(shí)驗(yàn)方法原理
不同批次的血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)的能力也不同，尤其是對(duì)克隆細(xì)胞的生長(zhǎng)。檢測(cè)不同批次的血淸，然后大批量購(gòu)買(mǎi)血清不僅能節(jié)約經(jīng)費(fèi)且能減少實(shí)驗(yàn)條件引起的差異，某些批次血清可能含有毒性或抑制生長(zhǎng)的化合物。
不同批次的血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)的能力也不同，尤其是對(duì)克隆細(xì)胞的生長(zhǎng)。檢測(cè)不同批次的血淸，然后大批量購(gòu)買(mǎi)血清不僅能節(jié)約經(jīng)費(fèi)且能減少實(shí)驗(yàn)條件引起的差異，某些批次血清可能含有毒性或抑制生長(zhǎng)的化合物。
實(shí)驗(yàn)步驟
1) 從不同生產(chǎn)廠商得到 100ml 的批次的試驗(yàn)血清。
2) 用本實(shí)驗(yàn)室常用的 2~3 種細(xì)胞來(lái)檢測(cè)血清。
3) 將 lml 含有 20% 的上述待檢血清的培養(yǎng)液加于 9 個(gè)培養(yǎng)皿中（35-mm), 每種批次的血清用 9 碟細(xì)胞培養(yǎng)皿進(jìn)行檢測(cè)。
4)9 碟中每 3 碟接種入 500、1000、2000 個(gè)細(xì)胞。如果細(xì)胞存活率較高，細(xì)胞數(shù)可降低。細(xì)胞不必長(zhǎng)滿，但應(yīng)長(zhǎng)到形成足夠密度的單個(gè)克隆。細(xì)胞應(yīng)在不含血清的培養(yǎng)液屮稀釋?zhuān)悦鈿埩粞獪[遺留在現(xiàn)有的培養(yǎng)液中。細(xì)胞應(yīng)加至體積為 1 ml 以便血清終濃度為 10%?，F(xiàn)用的血清作為該方案的內(nèi)標(biāo)。
5) 配制 80 ml 含待檢血清濃度為 10% 的培養(yǎng)液。用該培養(yǎng)液每周給細(xì)胞換液兩次，共兩周。克隆在此期間應(yīng)較明顯。
6) 進(jìn)行克隆染色，比較不同批次血清的克隆數(shù)?？寺〉娜旧?1xPBS 漂洗，瀝干 PBS 后，加人 2 ml 的 Wright 染液（Fisher Scientific)，室濕染色 8 分鐘后，加人 2 ml 水, 室溫放置 10 分鐘后用水漂洗，觀察克隆的數(shù)量和大小。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類(lèi)作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購(gòu)中心