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單克隆培養(yǎng)的原理介紹

來源:Bio-Techne   2020年07月20日 15:39  
  單克隆培養(yǎng)對增殖力比較強的細(xì)胞操作起來的確比較適合,但增殖較慢的細(xì)胞也不是不可以,至于稀釋到每孔只有1~2細(xì)胞,細(xì)胞稀釋的密度要取決你每孔所加的培養(yǎng)液體積,一般說來保證每孔內(nèi)平均細(xì)胞數(shù)為0.5個即可,稀釋并加入培養(yǎng)孔后,在顯微鏡下觀察,將只有一個細(xì)胞的孔標(biāo)記出。
  經(jīng)過抗體測定的陽性孔,可以擴大培養(yǎng),進(jìn)行克隆,以得到單個細(xì)胞的后代分泌單克隆抗體,克隆的時間一般說來越早越好,因為在這個時期各種雜交瘤細(xì)胞同時旺盛生長,互相爭奪營養(yǎng)和空間,而產(chǎn)生抗體的細(xì)胞有被淹沒和淘汰的可能,但克隆時間也不宜太早,太早細(xì)胞性狀不穩(wěn)定,數(shù)量少也易丟失??寺』年栃噪s交瘤細(xì)胞,經(jīng)過一段時期培養(yǎng)之后,也還會因為細(xì)胞突變或特定染色體的丟失,使部分細(xì)胞喪失產(chǎn)生抗體的能力,所以需要再次或多次克隆化培養(yǎng)。
    單克隆培養(yǎng)原理:將細(xì)胞經(jīng)熒光抗體染色后,經(jīng)噴嘴形成單個細(xì)胞的線形液滴,熒光素發(fā)射熒光,此信號由光電倍增管接收,再結(jié)合細(xì)胞形態(tài)大小產(chǎn)生光散射信號,經(jīng)電腦處理,產(chǎn)生信號并與預(yù)定的信號對比,根據(jù)細(xì)胞熒光強度及細(xì)胞大小不同,將細(xì)胞分成不同級別,在電場中發(fā)生偏離,而分別收集于不同容器中。

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