MB10067.4 v.A

  細胞培養(yǎng)液氧化應(yīng)激活性氧超氧陰離子比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書

（中文版）

主要用途

  細胞培養(yǎng)液氧化應(yīng)激活性氧超氧陰離子比色法定量檢測試劑是一種旨在通過硝基藍四氮唑染料，受到超氧陰離子O₂^-的還原，產(chǎn)生不溶性藍黑*素沉淀，由分光光度儀比色分析，定量檢測細胞外超氧陰離子活性氧族的生成和增加的*而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、衰老、代謝和營養(yǎng)學(xué)等的研究。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，檢測敏感。

技術(shù)背景

超氧自由基陰離子（superoxide radical；O^2-）、過氧化氫（hydrogen peroxide；H₂O₂）、羥自由基或氫氧基（hydroxyl radical；OH^-）、過氧化基（peroxyl radical；ROO^-）、氫過氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO^-）、過氧亞硝基陰離子（peroxynitrite anion；ONOO^-）次氯酸（hypochlorous acid；HClO）、半醌自由基（semiquinone radical）、單線態(tài)氧氣（singlet oxygen）等細胞內(nèi)活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的產(chǎn)生和增多，將導(dǎo)致細胞衰老或凋亡。染料四氮唑蘭（tetrazolium）化合物，包括硝基藍四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT）和二甲基噻唑二苯基四唑嗅藍（3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide；MTT），一旦受到超氧陰離子O₂^-的直接還原，便產(chǎn)生不溶性藍黑色甲暨色素，在分光光度儀下（650nm波長），呈現(xiàn)吸光峰值的變化。據(jù)此定量檢測細胞外超氧陰離子活性氧族的濃度。

產(chǎn)品內(nèi)容

  染色液（Reagent A）      2毫升

產(chǎn)品說明書  1份

保存方式

保存  染色液（Reagent A）在－20℃冰箱里，嚴格避免光照；有效保證6月

用戶自備

*細胞培養(yǎng)液（GMS12052）：用于細胞操作所需的培養(yǎng)基

細胞培養(yǎng)箱：用于細胞染色孵育

分光光度儀或酶標儀：用于染色定量

實驗步驟

• 準備好待測的細胞培養(yǎng)板的培養(yǎng)細胞
• 分別小心按下表移取多孔細胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液上清到相應(yīng)的另一多孔細胞培養(yǎng)板（注意：避免觸及細胞）

• 加入適量的  染色液（Reagent A）到上述培養(yǎng)板里的每個培養(yǎng)孔里（見下表）

• 輕輕搖動細胞培養(yǎng)板，混勻
• 放進37℃細胞培養(yǎng)箱里孵育60分鐘
• （選擇步驟）肉眼觀察：溶液呈現(xiàn)藍黑色，顯示超氧陰離子濃度增強

7． 即刻放進分光光度儀測讀，波長為650 nm

8． 構(gòu)建細胞外超氧陰離子活性氧生成曲線：縱座標（Y軸）為吸光值（OD）；橫坐標（X軸）為細胞數(shù)、時間點或藥物處理濃度等

注意事項

• 本產(chǎn)品為100次（96孔板）操作
• 細胞培養(yǎng)操作，須無菌狀態(tài)下進行
• 操作時，須戴手套
• 孵育時，避免光照
• 如果超氧陰離子活性氧濃度過低，可以延長孵育時間至4小時
• 建議96孔細胞培養(yǎng)板中每孔細胞密度為10⁴細胞
• 本公司提供系列活性氧檢測試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰