Cas14a1核酸酶是一種內(nèi)切核酸酶,其在tracrRNA:crRNA(或sgRNA)的引導(dǎo)下,特異結(jié)合并切割靶標(biāo)ssDNA,且無(wú)需PAM位點(diǎn)。相比于其他的Cas蛋白,Cas14蛋白的分子量普遍較?。?00-700AA),其中,上海惠誠(chéng)生物提供的Cas14a1的分子量?jī)H為為64.9 kd(含有3.4 k的N端標(biāo)簽序列)。與Cas12類似,Cas14a1也可以結(jié)合靶標(biāo)核酸并激活其ssDNA反式切割活性,從而被應(yīng)用于靶標(biāo)核酸的分子檢測(cè)。然而,與Cas12不同的是,Cas14a1只能結(jié)合ssDNA靶標(biāo),因此:經(jīng)過(guò)擴(kuò)增富集的靶標(biāo)核酸需使用T7核酸外切酶進(jìn)行處理,且其中一條擴(kuò)增引物需要實(shí)驗(yàn)磷硫酰化修飾以確保T7核酸外切酶僅切割其中一條鏈,從而留下ssDNA靶標(biāo)鏈以用于Cas14a1介導(dǎo)的分子檢測(cè)。上?;菡\(chéng)生物優(yōu)勢(shì)提供CRISPR基因編輯系列。
正對(duì)照反式切割結(jié)果:
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