游離脂肪酸（free fatty acid，F(xiàn)FA）含量測定試劑盒說明書

 微量法 100T/48S

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義：

FFA 既是脂肪水解的產(chǎn)物，又是脂肪合成的底物。FFA 的濃度與脂類代謝、糖代謝、內(nèi)分泌

功能有關(guān)，也可反映食物貯藏中的品質(zhì)變化。

測定原理：

在弱酸性條件下，F(xiàn)FA 與銅鹽反應(yīng)生成銅皂，在 715nm 處有特征吸收峰，在一定范圍內(nèi)游

離脂肪酸含量與顯色程度呈線性關(guān)系。

自備儀器和用品：

研缽、臺式離心機、震蕩儀、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體×1 瓶，4℃保存。

樣品中 FFA 提?。?/span>

1、 血液：將所取血液，室溫靜置 1 h 后，于 4 ℃ 離心機 3500 rpm 離心 15min，取上清 0.1mL，

加 1mL 試劑一，震蕩提取 3h，8000g，4℃離心 10min，取上清液待測。

2、 組織：組織用蒸餾水沖洗干凈后，用吸水紙吸取表面水分，搗碎后稱取約 0.1g 轉(zhuǎn)移至離

心管，按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例加入試劑一，震蕩提取 3h，

8000g，4℃離心 10min，取上清液待測。

3、 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建

議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 試劑一）加入試劑一，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲

2 秒，間隔 3 秒，總時間 3min）；震蕩提取 3h，然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清

待測。

測定操作：

1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 715 nm。

2. 空白管：取上清液 0.4mL，加 0.2mL 試劑二，充分震蕩 5min，室溫靜置 5min，取上層

200μ L 于微量石英比色皿/96 孔板，調(diào)零。

3. 測定管：取上清液 0.4mL，加 0.2mL 試劑三，充分震蕩 5min，室溫靜置 5min，取上層

200μ L 于微量石英比色皿/96 孔板，測定吸光值，記為 A。

FFA 含量計算：

a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0075 x+ 0.0055，R

2

=0.994

1. 血液中 FFA 含量計算

FFA（nmol/mL）=(A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷V 樣=1333×(A-0.0055)

2. 組織中 FFA 含量計算

（1）按樣本蛋白濃度計算

FFA（nmol/mg prot）= (A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷(V 樣×Cpr)=133×(A-0.0055)÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計算

FFA（nmol/g）= (A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)=133×(A-0.0055)÷W

3. 按細(xì)胞數(shù)量計算

FFA（nmol/104

cell）= (A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量)

=133×(A-0.0055)÷細(xì)胞數(shù)量

V 樣總：上清液總體積，1 mL；V 反總：反應(yīng)總體積，0.4mL；V 樣：加入樣本體積，0.4mL；

W：樣本鮮重，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL

b.使用 96 孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0038 x+ 0.0055，R

2

=0.994

1. 血液中 FFA 含量計算

FFA（nmol/mL）= (A-0.0055)÷0.0038×V 反總÷V 樣= 2666×(A-0.0055)

2. 組織中 FFA 含量計算

（1）按樣本蛋白濃度計算

FFA（nmol /mg prot）= (A-0.0055)÷0.0038×V 反總÷(V 樣×Cpr)

= 266×(A-0.0055)÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計算

FFA（nmol /g）= (A-0.0055)÷0.0038×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)

= 266×(A-0.0055)÷W

3. 按細(xì)胞數(shù)量計算

FFA（nmol /104

cell）= (A-0.0055)÷0.0038×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量)

=266×(A-0.0055)÷細(xì)胞數(shù)量

V 樣總：上清液總體積，1 mL；V 反總：反應(yīng)總體積，0.4mL；V 樣：加入樣本體積，0.4mL；

W：樣本鮮重，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL

注意事項：

1. 蛋白含量不可直接用提取的上清液直接測定，可用蒸餾水或緩沖液或生理鹽水選用本公

司的 BCA 法蛋白含量測定試劑盒。

2. di檢出限為 0.8 mmol/L。