朊病毒是可以引起多種嚴(yán)重的神經(jīng)性退行性疾病的蛋白質(zhì)，包括牛海綿狀腦病，也是我們常說的瘋牛病。

據(jù)報(bào)道，從目前一些感染的動物看，一些朊病毒株在神經(jīng)系統(tǒng)聚集之前，會首先在淋巴組織進(jìn)行復(fù)制和聚集。這個現(xiàn)象成為嗜淋巴細(xì)胞現(xiàn)象，在朊病毒入侵神經(jīng)系統(tǒng)時起到重要作用。相反其他的朊病毒株在淋巴組織中沒有發(fā)現(xiàn)這個現(xiàn)象。

大量文獻(xiàn)表明淋巴組織中朊病毒的復(fù)制是需要樹突狀細(xì)胞（FDCS）。令人驚訝的是，朊病毒可以在肉芽瘤中被發(fā)現(xiàn)，然而肉芽瘤是一種可能因?yàn)槿狈渫粻罴?xì)胞而引起的炎癥癥狀，這對于朊病毒如何入侵淋巴組織和炎癥組織就有了新的問題。

本研究中檢測了兩種結(jié)構(gòu)特征相似，不同嗜淋巴細(xì)胞現(xiàn)象的朊病毒株，C-BSE和L-BSE。結(jié)果也表明朊病毒在脾臟和肉芽瘤中有聚集的能力。

實(shí)驗(yàn)材料與程序

1.實(shí)驗(yàn)建立

在接種朊病毒之前的21天和42天，對綿羊PrP轉(zhuǎn)基因（tg338）老鼠皮下注射PBS/CFA來誘導(dǎo)肉芽瘤的產(chǎn)生。在第0天對這些老鼠接種感染了C-BSE和L-BSE的老鼠腦漿（腦內(nèi)接種）。在接種后的不同時間收集大腦、脾臟、肉芽瘤樣品，并對這些樣品分別進(jìn)行免疫熒光或Western Blot檢測（圖1）。

2.免疫印跡

收集的組織樣本使用法國Bertin公司的Precellys生物樣品研磨器進(jìn)行研磨，2ml的研磨管，緩沖液含5%葡萄糖，搭配1.2mm的陶瓷研磨珠（也可以使用CK14研磨試劑盒），研磨程序如下：

脾臟：研磨轉(zhuǎn)速6500rpm，研磨時間45s，2個循環(huán)（Precellys Evolution可以使用8800rpm）

肉芽瘤：研磨轉(zhuǎn)速6500rpm，研磨時間45s，2個循環(huán)（Precellys Evolution可以使用8800rpm）

腦組織：研磨轉(zhuǎn)速6500rpm，研磨時間45s，1個循環(huán)（Precellys Evolution可以使用8800rpm）

組織勻漿里可以針對脾臟組織或肉芽瘤比較小的組織將葡萄糖含量從5%調(diào)整到10%或20%。樣本放在Criterion XT（Bio-rad，美國）凝膠上跑樣，電子信號傳遞到纖維膜（Bio-rad），使用生物素化的Sha31 anti-PrP單克隆抗體進(jìn)行標(biāo)記檢測。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

如圖2所示，在受C-BSE和L-BSE感染的老鼠腦組織、脾臟、肉芽瘤中不同天數(shù)顯示的PrP朊病毒檢測結(jié)果。L-BSE是有嗜淋巴細(xì)胞現(xiàn)象的朊病毒株，C-BSE是沒有嗜淋巴細(xì)胞現(xiàn)象的朊病毒株。其中在第43天時，在受L-BSE感染的脾臟和肉芽瘤中均檢測到了朊病毒，但在腦組織中沒有檢測到；在第85天時受C-BSE感染腦組織中檢測到了朊病毒；在第132天時，受感染腦組織中檢測到了大量的朊病毒聚集；結(jié)果表明受L-BSE這種有嗜淋巴細(xì)胞現(xiàn)象的朊病毒株感染的脾臟和肉芽瘤，也是會先在脾臟和肉芽瘤組織中產(chǎn)生朊病毒的復(fù)制，之后影響腦組織。

結(jié)論

L-BSE和C-BSE兩種朊病毒株雖然有相似的生物特性，但有不同的嗜淋巴細(xì)胞現(xiàn)象。我們從本研究中看出收到L-BSE感染的老鼠，在脾臟和肉芽瘤中都有朊病毒的聚集。另一方面在肉芽瘤中并沒有檢測到C-BSE朊病毒。這些結(jié)果表明對淋巴組織有依賴性的朊病毒株同時也對肉芽瘤有影響。使用法國Bertin公司的Precellys生物樣品研磨器可以高效研磨例如脾臟、腦組織、肉芽瘤等樣本，之后通過Western Blot完成檢測。此外，與Precellys搭配的Cryolys制冷系統(tǒng)可以快速降溫，保證在研磨的同時準(zhǔn)確控制研磨腔室溫度穩(wěn)定在0-10℃，為RNA和蛋白質(zhì)的提取保駕護(hù)航。