測定意義：

土壤總磷包括有機(jī)磷和無機(jī)磷，其中無機(jī)磷能夠直接被植物利用。土壤有機(jī)磷經(jīng)過礦化分解而轉(zhuǎn)化為無機(jī)磷。同時測定土壤總磷、有機(jī)磷和無機(jī)磷，可以全面反映土壤磷營養(yǎng)狀況。

測定原理：

利用鉬藍(lán)法定磷。取一份土樣，通過浸提法測定土壤無機(jī)磷含量；另外取一份土樣，經(jīng)高溫灼燒后，土壤有機(jī)磷轉(zhuǎn)化為無機(jī)磷，測得土壤總磷含量；總磷含量減去無機(jī)磷含量，即可計(jì)

算出有機(jī)磷含量。

貨號：YX-W-B905                                                 規(guī)格：100管/96樣

土壤總磷/有機(jī)磷/無機(jī)磷含量測定試劑盒說明書

微量法

注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義： 

土壤總磷包括有機(jī)磷和無機(jī)磷，其中無機(jī)磷能夠直接被植物利用。土壤有機(jī)磷經(jīng)過礦化分解而轉(zhuǎn)化為無機(jī)磷。同時測定土壤總磷、有機(jī)磷和無機(jī)磷，可以全面反映土壤磷營養(yǎng)狀況。

測定原理：

利用鉬藍(lán)法定磷。取一份土樣，通過浸提法測定土壤無機(jī)磷含量；另外取一份土樣，經(jīng)高溫灼燒后，土壤有機(jī)磷轉(zhuǎn)化為無機(jī)磷，測得土壤總磷含量；總磷含量減去無機(jī)磷含量，即可計(jì)

算出有機(jī)磷含量。

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、臺式離心機(jī)、可調(diào)式水浴鍋，分析天平、可調(diào)式移液器、550℃高溫電爐、蒸餾水、100 目篩子（可更?。?。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。 臨用前用蒸餾水稀釋10倍后再用。

試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入8mL蒸餾水，充分溶解后加入4mL試劑二，混勻。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1 支，20μmol/L 無機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)品，4℃保存。

土壤不同形態(tài)磷提?。?/span>

1.無機(jī)磷：稱取通過100目篩子的風(fēng)干土樣0.01g，轉(zhuǎn)移到1mL離心管，加入1mL試劑一，震蕩混勻，然后置于45℃水浴1h，8000g，25℃離心10min，取上清液一，用于無機(jī)磷含量測定。

2.總磷提?。喝⊥ㄟ^100目篩子的風(fēng)干土樣，550℃灼燒 1h，冷卻后稱取約0.01g，轉(zhuǎn)移到1mL離心管，加入1mL試劑一，震蕩混勻，然后置于45℃水浴1h，8000g，25℃離心10min，取上清液二，用于總磷含量測定。

測定步驟：

1.分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到660nm，蒸餾水調(diào)零。

2.打開水浴鍋，調(diào)節(jié)溫度到40℃。

3.空白管：取EP管，依次加入100μL蒸餾水，100μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10min后于660nm 測定吸光度，記為A空白管。

4.標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，依次加入10μL標(biāo)準(zhǔn)液，90μL蒸餾水，100μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10min 后于660nm測定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

5.測定管：取EP管，依次加入10μL上清液一或者上清液二，90μL蒸餾水，100μL試劑三，

混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10min后于660nm測定吸光度，記為A測定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

土壤磷含量計(jì)算：

a.使用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

1.土壤無機(jī)磷含量（μmol/g）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)]×V 總÷W

=0.02×(A 測定－A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)－A 空白)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：20μmol/L； W：土壤樣品質(zhì)量，g； V 總：上清液一總體積，1 mL=0.001 L。

2.土壤總磷含量（μmol/g）=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測定－A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)－A 空白)]×V 總÷W

=0.02×(A 測定－A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)－A 空白)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：20μmol/L；W：土壤樣品質(zhì)量，g；V 總：上清液二總體積，1mL=0.001 L。

3.土壤有機(jī)磷（μmol/g）=土壤總磷-土壤無機(jī)磷

b. 使用 96 孔板測定的計(jì)算公式如下

1.土壤無機(jī)磷含量（μmol/g）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)]×V 總÷W

=0.02×(A 測定－A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)－A 空白)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：20μmol/L； W：土壤樣品質(zhì)量，g； V 總：上清液一總體積，1 mL=0.001 L。

2. 土壤總磷含量（μmol/g）=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測定－A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)－A 空白)]×V 總÷W

=0.02×(A 測定－A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)－A 空白)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：20μmol/L；W：土壤樣品質(zhì)量，g；V 總：上清液二總體積，1mL=0.001 L。

3．土壤有機(jī)磷（μmol/g）=土壤總磷-土壤無機(jī)磷

注意事項(xiàng)：

試劑三配制過程中，可能會產(chǎn)生黑色固體，其不影響結(jié)果，注意吸取時不要將黑色固體吸入。