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傘枝梨頭霉PCR試劑盒的設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循哪些原則
傘枝梨頭霉PCR試劑盒可用于檢測(cè)食品或其他材料中是否有的成分?，F(xiàn)代食品加工工藝改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性，因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無(wú)法對(duì)食材的真?zhèn)芜M(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定。同時(shí)部分食材還有致敏性，因此基于基因檢測(cè)的快速靈敏的食材來(lái)源檢測(cè)技術(shù)將對(duì)食品監(jiān)管和安全提供重要的保障。
特點(diǎn)：
1.即開(kāi)即用，用戶只需要提供病毒DNA模板。
2.引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化，靈敏性比使用世界動(dòng)物衛(wèi)生組織推薦的引物高100倍以上。
3.特異性高，引物是根據(jù)保守的vp72基因設(shè)計(jì)。
4..提供陽(yáng)性對(duì)照，便于分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5.PCRmix中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。本試劑盒足夠做40μL體系的PCR50次，只能用于科研。
傘枝梨頭霉PCR試劑盒設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度：15-30bp，常用為20bp左右。
?、谝飻U(kuò)增跨度：以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
?、鼙苊庖飪?nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3’端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
?、菀?’端的堿基，特別是倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
?、抟镏杏谢蚰芗由虾线m的酶切位點(diǎn)，被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)，這對(duì)酶切分析或分子很有好處。
?、咭锏奶禺愋裕阂飸?yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
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