背景介紹：中國(guó)的傳統(tǒng)醫(yī)藥既復(fù)雜又神奇，發(fā)展已有幾千年的歷史。但長(zhǎng)期以來(lái)，如何判斷中藥質(zhì)量的真、偽、優(yōu)、劣缺乏系統(tǒng)、科學(xué)的分析方法。比如對(duì)不同產(chǎn)地中藥材有效成份的控制，對(duì)不同栽培方式、不同采摘季節(jié)或不同加工炮制工藝后中藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)等一直沒(méi)有統(tǒng)一有效的方法。近幾年來(lái)，藥學(xué)工作者在中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究方面做了不少工作，積累了不少寶貴的經(jīng)驗(yàn)和方法。但總體來(lái)說(shuō)，中藥二元比較工作耗時(shí)、成本高，甚至有的方法缺少一定的科學(xué)依據(jù)，不夠充分、客觀。該應(yīng)用紀(jì)要采用先進(jìn)的分離檢測(cè)技術(shù)結(jié)合全新的UNIFI天然產(chǎn)物整體解決方案對(duì)此類應(yīng)用提出了有效解決問(wèn)題的思路。不同產(chǎn)地藥材化學(xué)成分的異同、不同廠家同一產(chǎn)品的差異、同一廠家不同批次間產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定性等都需要對(duì)類似樣品進(jìn)行比較，觀其成分異同，進(jìn)而找出差異，為后期的研究提供明確的指導(dǎo)方向。隨著分析儀器技術(shù)的不斷進(jìn)化，高分辨液質(zhì)聯(lián)用儀器（比如UPLC/QTof MS）的使用在逐步推廣。高分辨液質(zhì)聯(lián)用儀器可使樣品的分析時(shí)間縮短、分離效率提高，同時(shí)還有適應(yīng)性、專屬性高、檢測(cè)限低、進(jìn)樣量小、溶劑消耗少、自動(dòng)化程度高、定性能力高等特點(diǎn)，在中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制的地位也會(huì)越來(lái)越高。

本應(yīng)用紀(jì)要以兩個(gè)不同廠家的雙黃連口服液產(chǎn)品對(duì)比作為應(yīng)用實(shí)例向大家闡述新的沃特世UNIFI天然產(chǎn)物整體解決方案。該解決方案以沃特世超高效液相色譜（ACQUITY UPLC ® I-Class），四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜（Xevo ® G2-S QTof MS）以及UNIFI中藥數(shù)據(jù)庫(kù)為基礎(chǔ)，采用UNIFI二元比較工作流程對(duì)類似的樣品進(jìn)行比較，迅速找出差異，為后期的質(zhì)量監(jiān)控和制定相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)，從而大大提高了工作效率，并降低了對(duì)操作人員技術(shù)背景的要求。

實(shí)驗(yàn)條件樣品處理取雙黃連口服液200 μl溶解于2 mL H2O中（相當(dāng)于稀釋十倍），備用。進(jìn)樣體積為1 μl。液相色譜條件儀器： ACQUITY UPLC I-Class with FTN Sample Manger 色譜柱： ACQUITY UPLC HSS T3， 2.1×100 mm 1.8 μm，40 ℃ 樣品室溫度： 15 ℃ 流動(dòng)相A： 水 （0.1% 甲酸）流動(dòng)相B： 乙腈梯度：時(shí)間 （流速 溶劑A 溶劑B 曲線 mL/min） （%） （%） 0 0.5 95 5 開(kāi)始 1 0.5 90 10 6 8 0.5 55 45 6 12 0.5 45 55 6 13 0.5 5 95 6 15 0.5 95 5 1 質(zhì)譜條件儀器： Xevo G2-S QTof MS 采集質(zhì)量范圍： 100-1500 Da 掃描時(shí)間： 0.1 S 采集模式： ESI+和ESI-分辨率模式，MS E Lock mass： 亮氨酸腦啡肽（LE）1 ppm （0.3 S掃描，間隔：15 S）毛細(xì)管電壓： 3 KV（ESI+）/ 2.5 KV（ESI-）錐孔電壓： 100 V 碰撞能量（eV）： low CE：6 / High CE：20-45 電離源溫度： 120 ℃ 脫溶劑溫度： 500 ℃ 錐孔氣流速： 60 L/h 脫溶劑氣流速： 1000 L/h 數(shù)據(jù)采集時(shí)間： 15 min

雙黃連口服液的主要藥材來(lái)源為金銀花、黃芩及連翹，具有疏風(fēng)解表，清熱解毒的功效。對(duì)于上呼吸道感染、扁桃體炎、咽炎、病毒性肺炎等細(xì)菌和病毒感染性疾病有一定療效。其中黃芩苷、連翹苷、漢黃芩素是其主要活性成分。中國(guó)有很多廠家都生產(chǎn)該口服液產(chǎn)品。故我們借此極有代表性的實(shí)例來(lái)闡述UNIFI天然產(chǎn)物整體解決方案中二元比較的工作流程（圖1）。

結(jié)果：采用超高效液相色譜與四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜對(duì)兩個(gè)不同廠家雙黃連口服液的相關(guān)化學(xué)成分進(jìn)行數(shù)據(jù)采集。采用UNIFI天然產(chǎn)物整體解決方案中二元比較工作流程并結(jié)合UNIFI中藥數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，結(jié)果明確顯示了兩個(gè)樣品中相同組分圖，差異組分圖以及每個(gè)樣品的*組分列表。兩個(gè)廠家樣品二元比較的結(jié)果顯示廠家一的口服液中連翹酯苷 A、連翹酯苷B、右旋羥基連翹酯苷A、牛蒡苷、蘆丁等的含量遠(yuǎn)高于廠家二的口服液，而廠家二口服液中黃芩苷含量則較高。

討論： UNIFI天然產(chǎn)物整體解決方案包括ACQUITY UPLC I-Class超高效液相色譜、Xevo G2-S QTof四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜以及含中藥數(shù)據(jù)庫(kù)的UNIFI軟件平臺(tái)。該解決方案中包含了五個(gè)預(yù)設(shè)的二元比較工作流程模板及一個(gè)結(jié)果報(bào)告模版，使數(shù)據(jù)的采集與處理、數(shù)據(jù)庫(kù)檢索、結(jié)構(gòu)確認(rèn)以及打印報(bào)告全部自動(dòng)化。圖2是不同廠家雙黃連口服液的UPLC/QTof MS基峰離子色譜對(duì)比圖（BPI）。此圖顯示了采用超高效液相色譜分析復(fù)雜中藥體系的優(yōu)勢(shì)，運(yùn)行時(shí)間短（有效分離時(shí)間為12 min），且分離效率與峰容量皆高。同時(shí)，四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜又提供了質(zhì)量信息的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。除此之外，從圖2中可初步看出不僅這兩個(gè)生產(chǎn)廠家的化學(xué)成分復(fù)雜，而且口服液成分大多類似，如果不借助有效軟件的幫助從成分如此復(fù)雜的兩個(gè)樣品中快速準(zhǔn)確找出其共性與差異幾乎是不可能的。

 
天然產(chǎn)物研究無(wú)論是單一樣品組分定性還是不同樣品的組分比較, 明確組分的詳細(xì)信息是進(jìn)一步進(jìn)行其他研究的基礎(chǔ)。對(duì)已知藥材樣品成分分析的工作流程已在應(yīng)用紀(jì)要“采用UNIFI天然產(chǎn)物整體解決方案鑒定綠茶提取物中的化學(xué)成分（部件編號(hào)：720004837ZH）”有詳細(xì)闡述。我們依此工作流程，從UNIFI中藥數(shù)據(jù)庫(kù)中導(dǎo)入與金銀花、黃芩、連翹中藥材有關(guān)的所有化學(xué)成分，然后進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，并對(duì)樣品中的組分信息進(jìn)行鑒定。點(diǎn)擊任何一個(gè)預(yù)設(shè)的二元比較模板，便可得到與之相關(guān)的結(jié)果信息。比如，圖3便顯示了點(diǎn)擊二元比較概況總覽模板（BinaryOverview Plot）所得到的結(jié)果信息。