實驗方法原理 葉綠素是一種二羧酸的酯，可與堿起皂化作用，產(chǎn)生的鹽能溶于水，可用此法將葉綠素與類胡蘿卜素分開。葉綠素與類胡蘿卜素都具有共軛雙鍵，在可見光區(qū)表現(xiàn)出一定的吸收光譜，可用分光鏡檢查或用分光光度計精，確測定。葉綠素吸收光量子后轉(zhuǎn)變成的激發(fā)態(tài)葉綠素分子很不穩(wěn)定，當(dāng)它回到基態(tài)時，可以發(fā)出紅光量子，因而產(chǎn)生熒光。葉綠素的化學(xué)性質(zhì)也很不穩(wěn)定，容易受強光的破壞，特別是當(dāng)葉綠素與蛋白質(zhì)分離后，破壞更快。葉綠素分子中的鎂可被H+所取代而成為褐色的去鎂葉綠素，后者遇到Cu2+可形成綠色的銅代葉綠素，這種葉綠素在光下不易受到破壞，故常用此法制作綠色多汁植物的浸制標(biāo)本。

實驗材料

菠菜葉 木瓜葉

試劑、試劑盒

95﹪酒精 KOH甲醇溶液 醋酸 苯 醋酸銅粉 碳酸鈣 石英砂

儀器、耗材

天平 分光鏡 小電爐 試管 量筒 移液管 研缽 小燒杯 漏斗等

實驗步驟 1. 葉綠體色素提取

稱取新鮮葉片2g剪碎于研缽中，加少量95﹪酒精（或80﹪丙酮）和少量CaCO3粉及石英砂，研磨成勻漿，再加95﹪酒精（或80﹪丙酮）l0ml稀釋研磨后，用濾紙過濾于小瓶中，濾液即為葉綠體色素提取液。

2. 葉綠素的皂化作用（綠色素與黃色素的分離）

（1） 用移液管吸取葉綠體色素提取液約5ml放入試管中，再加入1.5ml左右20﹪KOH甲醇溶液,充分搖勻。

（2） 片刻后，加入5ml苯，搖勻，再沿試管壁慢慢加入1～1.5ml蒸餾水，輕輕混勻（勿激烈搖蕩），靜置試管架上，可看到溶液逐漸分為兩層，下層是稀的乙醇溶液，其中溶有皂化葉綠素a和b（以及少量葉黃素），上層是苯溶液，其中溶有黃色的胡蘿卜素和葉黃素。

3. H+和Cu2+對葉綠素分子中Mg2+的取代作用

（1） 吸取葉綠體色素提取液約5ml放入試管中，加入30﹪醋酸數(shù)滴，搖勻，觀察溶液顏色的變化。

（2）當(dāng)溶液變褐色后，傾出一半于另一試管中，投入幾粒醋酸銅粉，微微加熱，觀察溶液顏色變化，與未加醋酸銅的一管相比較。

（2）解釋上述顏色變化過程，并列出其反應(yīng)式。

4. 葉綠素的熒光現(xiàn)象

取比較濃的葉綠素提取液5ml放入試管中，在直射光下觀察溶液的透射光及反射光

的顏色有何不同？試述其原因。

5. 光對葉綠素的破壞作用

（1）取兩支試管，各加入經(jīng)稀釋的葉綠體色素提取液5ml，一管放在直射光下，另一管放在黑暗處，1～2 h后觀察二管溶液顏色有何變化。

（2） 另取上述實驗Ⅰ中用紙層析法分離成的色譜兩張，一張放在直射光下，另一張放在黑暗中。約1 h以后比較兩張色譜上四種色素的顏色各有何變化。

（3） 解釋以上結(jié)果。