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液相色譜柱在選擇時(shí)應(yīng)該注意什么參數(shù)變化
液相色譜柱，是一種用于液體色譜分析儀器在選擇色譜柱之前，先多了解自己的樣品和雜質(zhì)，他們的類型結(jié)構(gòu)、極性、酸堿性、分子量大小等等。以下內(nèi)容對(duì)色譜柱的參數(shù)進(jìn)行分析。
1、色譜柱尺寸
較長(zhǎng)的色譜柱組分保留較強(qiáng)，運(yùn)行時(shí)間較長(zhǎng)，柱效更高，分離度效果更好。在實(shí)際工作中應(yīng)綜合衡量運(yùn)行時(shí)間和柱效，選擇長(zhǎng)度適宜的色譜柱。例如含量測(cè)定、溶出檢測(cè)對(duì)于分離的要求較低，可選用較短的色譜柱，減少運(yùn)行時(shí)間；有關(guān)物質(zhì)一般選擇較長(zhǎng)的色譜柱，提高分離效果。
內(nèi)徑小的色譜柱靈敏度較高，峰型更窄，但是載樣量較小。如果載樣量滿足要求，需要更高更尖銳的峰提高靈敏度，可以選擇更小內(nèi)徑。但是如果進(jìn)樣量超過了柱載樣量，色譜峰將很大限度變寬。所以應(yīng)在靈敏度和載樣量之間綜合衡量。
粒徑小的色譜柱分離度較好，色譜柱壓力更大。如果5μm粒徑的色譜柱分離度稍有不足，則同型號(hào)3μm色譜柱的分離度一般會(huì)提供令人滿意的選擇性。
如果選擇較小尺寸的色譜柱，應(yīng)衡量柱外死體積對(duì)柱效的影響，柱外死體積包括連接管線、進(jìn)樣體積、色譜柱接頭與色譜柱連接處的空隙等。所以一般超高效液相使用的色譜柱不適用于常規(guī)液相儀。小規(guī)格色譜柱應(yīng)該使用同一品牌的儀器，減少連接處空隙引入的死體積。題外話：島津、安捷倫、waters之間儀器管線接頭和色譜柱不匹配，儀器和色譜柱品牌不一致必然引入較大連接空隙，應(yīng)注意這方面的影響。
2、其他參數(shù)
高比表面積具有較強(qiáng)的保留能力、柱容量和分離度，低比表面積能更快達(dá)到平衡狀態(tài)，這點(diǎn)在梯度淋洗中很有意義。
大孔徑的填料可以延長(zhǎng)大分子在填料中的滯留時(shí)間，達(dá)到充分分離，改善峰型。大分子樣品一般應(yīng)選擇較大孔徑色譜柱，如蛋白質(zhì)、多肽類。
單齒鍵合色譜柱平衡更快；雙齒鍵合穩(wěn)定性較好，柱容量較大。
碳栽量大保留較強(qiáng)，分離效果較好。反之保留較弱，分離效果較差。
封尾(也稱封端)柱能減輕堿性組分(陽(yáng)離子)與硅膠表面殘留硅氧負(fù)離子作用而引起的色譜峰拖尾現(xiàn)象；對(duì)于極性樣品經(jīng)封尾處理與未經(jīng)封尾處理的色譜柱選擇性也不同。一般堿性化合物應(yīng)選擇封尾處理的色譜柱。
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