摘要：本應(yīng)用簡(jiǎn)報(bào)展示了基于質(zhì)量源于設(shè)計(jì) (QbD) 原則分離氨氯地平及其已知 EP 雜質(zhì)的 UHPLC 方法。第二步，將該方法轉(zhuǎn)換并轉(zhuǎn)移到 HPLC 系統(tǒng)中。利用安 捷倫儀器控制框架 (ICF) 作為接口，通過(guò) Waters Empower 3 色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) (CDS) 控制 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜儀。系統(tǒng)集成了 Fusion QbD (S-Matrix Corp, Eureka, CA) 軟件，以實(shí)現(xiàn)基于 QbD 的方法開發(fā)過(guò)程。 使用免費(fèi)方法轉(zhuǎn)換工具將 UHPLC 條件下在亞 2 µm 色譜柱上開發(fā)的方法轉(zhuǎn)移 至利用 HPLC 系統(tǒng)的常規(guī) QA/QC 工作流程。在進(jìn)一步優(yōu)化和評(píng)估過(guò)程中，使 用 Agilent 1290 Infinity II 方法開發(fā)系統(tǒng)上的安捷倫智能系統(tǒng)模擬技術(shù) (ISET) 對(duì) 目標(biāo) HPLC 系統(tǒng)的性能特點(diǎn)進(jìn)行模擬。在轉(zhuǎn)移至目標(biāo)系統(tǒng)后，滿足所有關(guān)鍵 方法屬性 (CMA)，并對(duì)重現(xiàn)性進(jìn)行了驗(yàn)證。

 前言 ：滿足 ICH Q8 (R2) 和 ICH Q2 (R2) 指導(dǎo)原 則的基于質(zhì)量源于設(shè)計(jì) (QbD) 的方法 開發(fā)及方法驗(yàn)證越來(lái)越受到制藥分析 研發(fā)領(lǐng)域的關(guān)注2 。在不同色譜柱固定 相的篩選過(guò)程中，在較短的亞 2 µm 色 譜柱上使用 UHPLC 方法可顯著提高柱 效。然而，開發(fā)完成后需要將終方 法轉(zhuǎn)移至 QA/QC 部門，而該部門中的 大部分液相色譜系統(tǒng)為傳統(tǒng) HPLC 系 統(tǒng)。在不影響關(guān)鍵方法屬性 (CMA) 的 前提下從 UHPLC 向 HPLC 進(jìn)行方法轉(zhuǎn) 移是一個(gè)具有挑戰(zhàn)性的過(guò)程2 。由于 系統(tǒng)延遲體積和梯度混合精度存在差 異，因此即使在 UHPLC 系統(tǒng)中采用傳 統(tǒng) HPLC 色譜柱開發(fā)的方法，在轉(zhuǎn)移 至 HPLC 系統(tǒng)后仍無(wú)法確保性能* 相同。為克服這些問(wèn)題，安捷倫開發(fā) 出安捷倫智能系統(tǒng)模擬技術(shù) (ISET)， 以模擬常用目標(biāo)系統(tǒng)的特性3 。 本應(yīng)用簡(jiǎn)報(bào)展示了作為基于 QbD 的穩(wěn) 定方法開發(fā)過(guò)程的通用 UHPLC 解決方 案的 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜儀 的使用，以及第三方 QbD 軟件 (Fusion QbD) 與 Waters Empower 3 CDS 控制下 的 1290 Infinity II 液相色譜儀的使用。 后，還展示了安捷倫 ISET 如何模擬 QA/QC 環(huán)境下常用的處于第三方軟件 控制下的不同目標(biāo)液相色譜系統(tǒng)的性 能特點(diǎn)。

 實(shí)驗(yàn)部分 ：儀器 利用 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜方 法開發(fā)系統(tǒng)進(jìn)行方法開發(fā)。1290 Infinity II 方法開發(fā)解決方案的各個(gè)模塊和組 件包括： • Agilent 1290 Infinity 閥驅(qū)動(dòng) (G1170A) 和 12 位/13 通溶劑選 擇閥 (G4235A) • Agilent 1290 Infinity II 高速泵 (G7120A) • Agilent 1290 Infinity II Multisampler (G7167B)，保持在 4 °C • Agilent 1290 Infinity II 高容量柱溫 箱 (G7116B)，配備 8 位/18 通色 譜柱選擇閥 (5067-4233) • Agilent 1290 Infinity II 二極管陣列 檢測(cè)器 (G7117B) 

 所有 Agilent 1290 Infinity II 模塊的低固件要求為：B、C 和 D.06.70。利用 Agilent 1260 Infinity 液相色譜儀對(duì) 轉(zhuǎn)移后方法的重現(xiàn)性進(jìn)行驗(yàn)證。1260 Infinity 液相色譜儀的各個(gè)模塊包括： • Agilent 1260 Infinity 二元泵 (G1312B) • Agilent 1260 Infinity 自動(dòng)進(jìn)樣器 (G1367E) • Agilent 1260 Infinity 柱溫箱 (G1316A) • Agilent 1260 Infinity 二極管陣列 檢測(cè)器 (G4212B)

軟件 • Fusion QbD 自動(dòng)化液相色譜方法 開發(fā)軟件 (S-Matrix Corp, Eureka, CA)（版本：9.7.1，Build 458） • Waters Empower 軟件（版本 3 build 3471），配備系統(tǒng)適用性測(cè) 試包 • 沃特世儀器控制軟件 (ICS) 2.1 HF1 包括安捷倫 ICF 和驅(qū)動(dòng)程序 包 (A.02.03 DU1 HF2) • ISET 4（驅(qū)動(dòng)程序版本 A.02.11）

試劑與樣品 所有溶劑均為 HPLC 級(jí) (RCI Labscan Ltd, Thailand)。苯磺酸氨氯地平 (API) 標(biāo)準(zhǔn)品以及已知的 EP 雜質(zhì) A、B、D、 E、F 和 G 購(gòu)自印度 Anant Pharmaceuticals Pvt Ltd。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，按照歐洲藥 典 (EP) 規(guī)定的苯磺酸氨氯地平樣品前 處理方案進(jìn)行操作，其中在 API 中加 入已知雜質(zhì)4 。 工作流程 方法開發(fā)工作流程以篩選過(guò)程作為起 始，通過(guò)篩選七種短亞 2 µm 色譜柱組 合兩種有機(jī)溶劑和七種不同 pH 值水 相溶劑的液相，確定苯磺酸氨氯地平 標(biāo)準(zhǔn)品和雜質(zhì)分析的佳色譜分離條 件。使用在 Empower 3 控制下的 1290 Infinity II 液相色譜方法開發(fā)系統(tǒng)和 Fusion QbD 軟件，進(jìn)行該色譜柱固定 相的篩選實(shí)驗(yàn)（圖 2）。對(duì)于初始篩選 階段發(fā)現(xiàn)的佳色譜條件（滿足篩選 階段的分析目標(biāo)概況 (ATP) 要求），通 過(guò)多變量統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)根據(jù) QbD 原理創(chuàng)建 設(shè)計(jì)空間來(lái)進(jìn)一步完整優(yōu)化，從而形 成穩(wěn)定的 UHPLC 方法（滿足優(yōu)化階段 的 ATP 要求）。 第二步，將該 UHPLC 方法轉(zhuǎn)移至填料 粒徑不同的兩根 HPLC 色譜柱上。為 了模擬目標(biāo)系統(tǒng)的性能特點(diǎn)，Agilent 1290 Infinity II UHPLC 在啟用 ISET 工 具后，即在模擬模式下運(yùn)行。模擬 Agilent 1260 Infinity 系統(tǒng)的梯度混合行 為和自動(dòng)進(jìn)樣器延遲體積。 將 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜儀在 模擬模式下的性能結(jié)果與目標(biāo)系統(tǒng)的 結(jié)果進(jìn)行比較。確定系統(tǒng)適用性雜 質(zhì)（雜質(zhì) B 和 G）和 API 的保留時(shí)間 (RT)、峰面積和分離度的重現(xiàn)性

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結(jié)論 利用安捷倫儀器控制框架 (ICF) 軟件作 為接口，通過(guò) Waters Empower 3 色譜 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)、Waters ICS 和 Fusion QbD 軟件控制 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜儀，可開發(fā)出快速而穩(wěn)定的 UHPLC 方法。根據(jù) QbD 原理，在優(yōu)化 后生成設(shè)計(jì)空間。根據(jù)可接受標(biāo)準(zhǔn)對(duì) 五點(diǎn)設(shè)計(jì)空間進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果表明空 間滿足所有標(biāo)準(zhǔn)。CMA 的預(yù)測(cè)值與實(shí) 驗(yàn)值相符。方法滿足系統(tǒng)適用性要求 （雜質(zhì) B 和 G 的分離度 > 2），且所有色 譜峰在 3.7 分鐘的梯度時(shí)間內(nèi)均達(dá)到了 基線分離。終 UHPLC 方法具有重現(xiàn) 性（API 和雜質(zhì) G 峰面積 RSD < 0.5） 與穩(wěn)定性。 使用安捷倫 ISET 技術(shù)實(shí)現(xiàn)了從 Agilent 1290 Infinity II UHPLC 系統(tǒng)到 Agilent 1260 Infinity 系統(tǒng)的無(wú)縫方法轉(zhuǎn)換。該方法 可適應(yīng)目標(biāo)系統(tǒng)的壓力限值。對(duì)模擬 模式下的結(jié)果與目標(biāo)系統(tǒng)的結(jié)果進(jìn) 行了比較。結(jié)果證明，將 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜儀、ISET、ICF 以及 第三方 CDS 和 Fusion QbD 相結(jié)合，可 實(shí)現(xiàn)方法開發(fā)、QbD 原理和方法轉(zhuǎn)移。