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傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡使用的是場光源，標(biāo)本上每一點(diǎn)的圖像都會受到鄰近點(diǎn)的衍射或散射光的干擾;
激光共聚焦顯微鏡利用激光束經(jīng)照明針孔形成點(diǎn)光源對標(biāo)本內(nèi)焦平面的每一點(diǎn)掃描，標(biāo)本上的被照射點(diǎn)，在探測針孔處成像，由探測針孔后的光點(diǎn)倍增管(PMT)或冷電耦器件(cCCD)逐點(diǎn)或逐線接收，迅速在計(jì)算機(jī)監(jiān)視器屏幕上形成熒光圖像。
照明針孔與探測針孔相對于物鏡焦平面是共軛的，焦平面上的點(diǎn)同時聚焦于照明針孔和發(fā)射針孔，焦平面以外的點(diǎn)不會在探測針孔處成像，這樣得到的共聚焦圖像是標(biāo)本的光學(xué)橫斷面，克服了普通顯微鏡圖像模糊的缺點(diǎn)。
激光共聚焦顯微鏡是采用激光作為光源，在傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡基礎(chǔ)上采用共軛聚焦原理和裝置，并利用計(jì)算機(jī)對所觀察的對象進(jìn)行數(shù)字圖象處理的一套觀察、分析和輸出系統(tǒng)。
把光學(xué)成像的分辨率提高了30%~40%，使用紫外或可見光激發(fā)熒光探針，從而得到細(xì)胞或組織內(nèi)部微細(xì)結(jié)構(gòu)的熒光圖像，在亞細(xì)胞水平上觀察生理信號及細(xì)胞形態(tài)的變化，成為形態(tài)學(xué)，分子生物學(xué)，神經(jīng)科學(xué)，藥理學(xué)，遺傳學(xué)等領(lǐng)域中新一代的研究工具。
下面讓我們一起來了解一下激光共聚焦顯微鏡的優(yōu)點(diǎn)吧
1、以激光為光源，在相應(yīng)的熒光探針標(biāo)記后，對樣本進(jìn)行逐點(diǎn)掃描，逐層獲得二維光學(xué)橫斷面圖像，具有“細(xì)胞CT”的功能，并可通過計(jì)算機(jī)三維重建軟件支持，獲得三維圖像，并可以任意角度旋轉(zhuǎn)，觀察細(xì)胞，組織立體形態(tài)和空間關(guān)系;
2、可以對活細(xì)胞和組織進(jìn)行無損傷的觀察，動態(tài)測量細(xì)胞內(nèi)的Ca離子濃度和pH值等活細(xì)胞生理信息;
3、可對細(xì)胞膜的流動性，細(xì)胞間通訊，細(xì)胞融合，細(xì)胞骨架彈性測量等，可用作“光刀子”完成細(xì)胞內(nèi)“外科手術(shù)”。這一技術(shù)可以對活細(xì)胞和組織進(jìn)行原位動態(tài)定量的觀察和測量。
與傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡相比，激光共聚焦顯微鏡具有更高的分辨率，實(shí)現(xiàn)多重?zé)晒獾耐瑫r可觀察并可形成清晰的三維圖像等優(yōu)點(diǎn)
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