測定意義:AI的適pH為3~5。AI分為可溶性AI(S-AI)和細(xì)胞壁不溶性AI(B-AI)兩種類型。S-AI主要存在于細(xì)胞液泡或自由空間中,適 pH 為4.5~5.0(酸性),通過降解液泡中蔗糖,調(diào)節(jié)液泡中蔗糖的利用和果實內(nèi)糖類的積累。
測定原理:NI催化蔗糖分解產(chǎn)生還原糖,進一步與3,5-二硝基水楊酸反應(yīng),生成棕紅色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范圍內(nèi)510nm光吸收值與還原糖生成量成正比。通過光吸收增加速率來計算NI活性
需要的儀器,耗材:可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
產(chǎn)品說明: 蔗糖轉(zhuǎn)化酶(Invertase,Ivr)催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一。根 據(jù)適 pH,將高等植物 Ivr 分為酸性轉(zhuǎn)化酶(AI)和中性轉(zhuǎn)化酶(NI)兩種類型。NI 主要存在于細(xì)胞質(zhì)中,負(fù) 責(zé)分解細(xì)胞質(zhì)中蔗糖為果糖和葡萄糖。 NI 催化蔗糖分解產(chǎn)生還原糖,進一步與 3,5-二硝基水楊酸反應(yīng),生成棕紅色氨基化合物,在 540nm 有特征 光吸收,在一定范圍內(nèi) 540nm 光吸收值與還原糖生成量成正比。通過光吸收增加速率來計算 NI 活性。
注意:實驗之前建議選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品: 可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰、蒸餾水。
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