小鼠ELISA試劑盒用此法判別效果要求試驗(yàn)條件十分安穩(wěn)，試劑的制備有必要標(biāo)準(zhǔn)化，陽性和陰性的對(duì)照品應(yīng)契合必定的規(guī)格，須配用精密的儀器，并嚴(yán)格按規(guī)則操作。陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的體系中通過對(duì)許多標(biāo)本的試驗(yàn)檢測(cè)而得到的?，F(xiàn)舉某種檢測(cè) HBsAg 的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對(duì)照品為不含HBsAg 的復(fù)鈣人血漿，陽性對(duì)照品HBsAg 的含量標(biāo)明為P=9±2ng /ml。每次試驗(yàn)設(shè)2 個(gè)陽性對(duì)照和3 個(gè)陰性對(duì)照。

測(cè)得A 值后，先核算陰性對(duì)照A 值的平均數(shù)（NC X ）和陽性對(duì)照A 值的平均數(shù)（PCX），兩個(gè)平均數(shù)的差（P-N）有必要大于一個(gè)特定的數(shù)值（例0.400），試驗(yàn)才有用。3 個(gè)陰性對(duì)照A 值均應(yīng)≥0.5×NCX，并≤1.5 ×NCX，如其中之一超出此規(guī)模，ELISA試劑盒則棄去，罷了另兩個(gè)陰性對(duì)照從頭核算NCX；如有兩個(gè)陰性對(duì)照A 值超出以上規(guī)模，則該次試驗(yàn)無效。

標(biāo)本 A 值＞陽性判定值的為陽性，小于陽性判定值的為陰性。小鼠ELISA試劑盒應(yīng)留心的是，式中0.05 為該試劑盒的常數(shù)，只適合于該特定條件下，而不是對(duì)各種試劑均可通用。依據(jù)以上敘說能夠看出，在這種方法中陰性對(duì)照和陽性對(duì)照也起到試驗(yàn)的質(zhì)控作用，試劑蛻變和操作不妥均會(huì)發(fā)生"試驗(yàn)無效"的效果。

 b.標(biāo)本/陰性對(duì)照比值在比賽法ELISA試劑盒中，陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強(qiáng)度取決于反應(yīng)中酶結(jié)合物的濃度和參與比賽抑制物的量，一般調(diào)理陰性對(duì)照的吸光度在1.0-1.5 之間，此時(shí)反應(yīng)為靈敏。比賽法 ELISA 不易用自視判別效果，因肉眼很難區(qū)別弱陽性反應(yīng)與陰性對(duì)照的顯色差異，一般均用比色計(jì)測(cè)定，讀出S、P 和N 的吸光值。核算方法首要也有兩種，即陽性判定值法和抑制率法。