正在進行“戰(zhàn)斗”的CAR-T細胞

由于CAR-T能夠定向治療疾病，又被稱作給患者“活的藥”。目前CAR-T治療只是用于少量臨床實驗和晚期血癌的患者治療。由于其它的治療方案都已經(jīng)沒有辦法時，CAR-T的顯著效果這都引起研發(fā)人員和公眾的關(guān)注，這些患者中包括成人和孩子。2017年，CAR-T治療被美國FDA批準應(yīng)用于孩子急性淋巴細胞白血病和成人晚期細胞癌。由于T細胞采取患者本身體內(nèi)，不會產(chǎn)生免疫系統(tǒng)的抗性，因此幫忙患者進行治療疾病。

CAR-T治療流程

標準的CAR-T治療流程主要分為以下七個步驟進行（整個療程持續(xù)5周左右）：

1.評估病人是否符合CAR-T治療的適應(yīng)癥

2.分離T細胞：通過外周血血細胞分離機從腫瘤病人血液中分離出單個核細胞，進一步純化T細胞。

3.改造T細胞：用基因工程技術(shù)，把一個含有能識別腫瘤細胞且激活T細胞的嵌合抗原受體的病毒載體轉(zhuǎn)入T細胞，即把T細胞改造成CAR-T細胞。

4.擴增CAR-T細胞：在體外培養(yǎng)以大量擴增CAR-T細胞。一般一個病人需要幾千萬，乃至幾億個CAR-T細胞，體重越大，需要細胞越多。

5.CAR-T細胞回輸入人體：把擴增好的CAR-T細胞通過靜脈回輸?shù)讲∪梭w內(nèi)，開始進行腫瘤細胞免疫治療。

6.監(jiān)控反應(yīng)：嚴密監(jiān)護病人身體反應(yīng)，尤其是細胞輸入體內(nèi)后一至兩周內(nèi)可能發(fā)生劇烈不良反應(yīng)。

7.評估治療效果：多在回輸CAR-T細胞后第15天和第30天評估對原發(fā)病的治療效果。

目前研究學(xué)者正在為其他類型的CAR-T治療，即通用型CAR-T細胞。在采集過程中，T細胞不是來自患者，而是取自已經(jīng)治愈的患者體內(nèi)。這樣就不用針對每個病例，而單獨進行培養(yǎng)各自的CAR-T細胞。通用型CAR-T療法則可以對異體T細胞進行提前制備，隨時提供給患者。此外，它也不受患者自身T細胞質(zhì)量的影響。但它還是一個新興領(lǐng)域，人們對CAR-T細胞治療的科學(xué)認識尚有許多需要解決的問題。

相關(guān)操作

1、血液中的白細胞有五種,按照體積從小到大是:淋巴細胞,嗜堿性粒細胞,嗜中性粒細胞,嗜酸性粒細胞和單核細胞。然后采用連續(xù)或者半連續(xù)的密度梯度離心的方法，再經(jīng)過磁珠法進行細胞富集。

程序控制離心機

2、通過分子生物學(xué)操作，讓質(zhì)粒攜帶CAR基因，大量擴增質(zhì)粒的目的是擴增CAR基因，用于轉(zhuǎn)導(dǎo)使用。其中質(zhì)粒是細菌、放線菌等生物中染色體（或擬核）以外的DNA分子，存在于細胞質(zhì)中（但酵母除外，酵母的2 μm質(zhì)粒存在于細胞核中），具有自主復(fù)制能力，使其在子代細胞中也能保持恒定的拷貝數(shù)，并表達所攜帶的遺傳信息，是閉合環(huán)狀的雙鏈DNA分子。

恒溫振蕩培養(yǎng)箱

3.用貼壁細胞和懸浮細胞培養(yǎng)，通過病毒轉(zhuǎn)染細胞的方法生產(chǎn)目的病毒。

滾瓶培養(yǎng)用于貼壁細胞培養(yǎng)

培養(yǎng)箱用于懸浮細胞培養(yǎng)