(一)高層瓊脂柱法
只需把含有1%葡萄糖的瓊脂培養(yǎng)基裝至試管的三分之二高度,冷卻凝固后,用接種針穿刺接種至瓊脂底部,培養(yǎng)后厭氧菌在底部生長,越接近表面越差。也可在滅菌后冷卻至45 ℃左右的瓊脂中,直接用無菌吸管加入適量的菌懸液,然后迅速用兩手搓轉(zhuǎn)式管使之混勻,再放入冷水中使之凝固。培養(yǎng)后厭氧菌會在管的深處出現(xiàn)。
(二)黃磷法
在能密封的玻璃容器的底部放少量的水和一塊擱板,培養(yǎng)皿或試管接種完后用紙包好放于擱板上。在容器的上部放一個(gè)無菌培養(yǎng)皿,把碳酸鈣和黃磷放于皿中,用燒紅的接種針引燃黃磷后,立即封閉容器。黃磷燃燒消耗掉容器中的氧,形成無氧環(huán)境。生成的氧化磷可被水吸收, 1L的容積需用1 g黃磷。
(三)厭氧罐法
1.厭氧罐體的結(jié)構(gòu)
目前使用的厭氧罐的罐體采用透明聚碳酸酯硬質(zhì)塑料或不銹鋼制成。圓形罐蓋的周邊凹槽內(nèi)嵌有橡皮圈,能使罐體和蓋密封。罐體與罐蓋之間有一個(gè)大的金屬螺旋夾,可使罐體密閉。罐體內(nèi)蓋的正中下方,有個(gè)金屬絲網(wǎng)盒或金屬盤,用于放催化劑。
2.厭氧罐的原理
原理是用物理或化學(xué)的方法把密閉容器中的氧除去,制造一個(gè)無氧環(huán)境。常用的方法是油氣換氣法和氣體發(fā)生袋法。
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