ITC等溫滴定量熱儀主要用于研究生物分子相互作用的完整熱力學(xué)參數(shù),包括結(jié)合常數(shù)、結(jié)合位點(diǎn)數(shù)、摩爾結(jié)合焓、摩爾結(jié)合熵、摩爾恒壓熱容和動(dòng)力學(xué)參數(shù),比如蛋白質(zhì)與核酸作用。ITC的應(yīng)用范圍各種生物分子的相互作用;酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué);蛋白質(zhì)折疊/去折疊;RNA折疊。
ITC等溫滴定量熱儀儀器的特點(diǎn)和用途:
等溫滴定微量熱儀系統(tǒng)直接測(cè)量生物化學(xué)結(jié)合過(guò)程中釋放或吸收的熱量,然后計(jì)算出結(jié)合親和力、化學(xué)計(jì)量、焓和熵。樣品制備和系統(tǒng)優(yōu)化工作量最少,數(shù)據(jù)生成快速、方便。等溫滴定微量熱儀僅需少量樣品即可進(jìn)行各種研究,包括表征小分子、蛋白質(zhì)、抗體、核酸、脂類和其他生物分子的分子間相互作用,也可用于測(cè)量酶動(dòng)力學(xué)。
ITC檢測(cè)方式與化學(xué)反應(yīng)中的酸堿滴定法相似,在ITC測(cè)定中,首先將一種反應(yīng)物置于一個(gè)溫控樣品池中,并通過(guò)一個(gè)熱電偶回路與一個(gè)參比池相偶聯(lián),樣品池和參比池處于相同的外部環(huán)境。特定的滴定劑(按實(shí)驗(yàn)需要選擇)定量滴加到樣品池中,當(dāng)樣品與滴定劑發(fā)生反應(yīng)時(shí),樣品池和參比池的溫度會(huì)發(fā)生變化,反應(yīng)變化的能量可以被ITC檢測(cè)儀靈敏地檢測(cè)出來(lái),并通過(guò)正反饋或負(fù)反饋觸發(fā)恒溫裝置保持溫度恒定。
如果要進(jìn)行分子間相互作用的研究,如研究蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用、蛋白質(zhì)與糖相互作用、藥物與蛋白質(zhì)相互作用、小分子物質(zhì)與蛋白質(zhì)間相互作用、酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)分析、核酸與核酸相互作用、核酸與小分子相互作用等,可以考慮運(yùn)用等溫滴定量熱技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。
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