大鼠正常食管上皮細(xì)胞；RNEEC/HL-012復(fù)蘇操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲(chǔ)存。-20℃不可超過(guò)1小時(shí)，以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。

GT115感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）

GT115感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）

MC1061F-感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）

MC1061F-感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）

S17-1感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）

S17-1感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）

JM330感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）

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MG1655感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）

MG1655感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）

F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）

F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）

DH5a 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

DH5a 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

SURE 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

SURE 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞