前言：乙氧酰胺苯甲酯，又名衣索巴，俗名球蟲酯，是尼卡巴嗪和氨丙啉等抗球蟲藥的增效劑。該藥品抗球蟲作用及機(jī)理與磺胺藥和抗菌增效劑相同，本身具有抗原蟲活性，它通過干擾四氫葉酸的合成阻止裂殖體的正常發(fā)育，從而產(chǎn)生抗球蟲作用。2020 年農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第 316 號-6-2020 飼料中乙氧酰胺苯甲酯的測定 高效液相色譜法正式頒布。本文所述方法以此標(biāo)準(zhǔn)為基礎(chǔ)，重點(diǎn)優(yōu)化了前處理流程。本方法采用 AgilentBond Elut AL-N 柱對樣品進(jìn)行萃取和凈化，并利用安捷倫 Poroshell 120 SB-C18 色譜柱對目標(biāo)物進(jìn)行快速分析，熒光檢測器進(jìn)行檢測，方法檢測限為 0.0048 μg/g，定量限為 0.016 μg/g。該方法簡化了公告標(biāo)準(zhǔn)中的前處理方法，在一定程度上節(jié)約了分析成本，提高了分析效率。對于基質(zhì)更為復(fù)雜的飼料樣品，仍需參考農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第 316 號-6-2020 所規(guī)定檢測方法。

乙氧酰胺苯甲酯的分析樣品前處理及分析條件取飼料樣品 5 (±0.05) g，于 50 mL 離心管中。根據(jù)生產(chǎn)實(shí)際需要，按照表 1 所示添加水平，向飼料樣品中添加乙氧酰胺苯甲酯標(biāo)準(zhǔn)品，制備得到加標(biāo)樣品，用于考察方法的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確度。

加標(biāo)后，將飼料混合均勻，靜置過夜。加入 20 mL 乙腈萃取，渦旋混合 1 min，超聲 10 min，5000 r/min 離心后取 10 mL 上清液在 30–40 °C 下氮吹近干；復(fù)溶于 5 mL 正己烷:丙酮 (v/v, 9:1)中；渦旋混合 1 min，超聲 10 min，5000 r/min 離心 10 min，上清液經(jīng)過 Bond Elut Al-N SPE 柱進(jìn)行凈化處理（SPE 流程見圖 1）；接收洗脫液，氮吹近干后，用 1 mL 甲醇重新定容，供LC-FLR 檢測，分析條件如表 2 所示。每個(gè)加標(biāo)樣品分別做三個(gè)平行樣品進(jìn)行測定。

色譜分析條件的優(yōu)化色譜分析采用安捷倫的 Poroshell 120 EC-C18 色譜柱，在普通液相色譜儀上可以實(shí)現(xiàn)快速分析。8 min 內(nèi)即可完成整個(gè)方法的運(yùn)行。由圖 4 可以看出，連續(xù)進(jìn)樣 6 針，色譜圖基本*重合，表明方法具有重復(fù)性。在 0.1–20.0 μg/g 范圍內(nèi)，儀器具有良好的線性，線性相關(guān)系數(shù) R2 為 0.9989，見圖 4。

結(jié)論本方法基于 Agilent Bond Elut AL-N SPE 柱，結(jié)合 Poroshell 120SB-C18 快速色譜柱，在普通液相色譜儀上實(shí)現(xiàn)了對飼料中乙氧酰胺苯甲酯的含量分析。方法準(zhǔn)確度和精密度均可達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)要求，同時(shí)簡化了前處理方法，大大提高了分析效率。該方法適用于實(shí)際生產(chǎn)中飼料中乙氧酰胺苯甲酯含量的測定。