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HPLC色譜概述
液相色譜法(HPLC)是上個世紀七十年代迅速發(fā)展起來的一項快速的分析分離技術(shù)，是現(xiàn)代分離測試的重要手段。
色譜法的分離原理是：溶于流動相(mobile phase)中的各組分經(jīng)過固定相時，由于與固定相(station phase)發(fā)生作用(吸附、分配、排阻、親和)的大小、強弱不同，在固定相中滯留時間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。
HPLC是在經(jīng)典的液相色譜法基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，其以液體作為流動相，并采用顆粒極細的固定相的柱色譜分離技術(shù)。其分離機制與常規(guī)柱色譜相同，但填料更加精細，需高壓泵推動，柱效高，分析速度快。
與氣相色譜不同的是液相色譜中流動相亦參與組分的分離過程，其組成、比例和pH值可靈活調(diào)節(jié)，分離模式多樣。在實際操作中主要通過改變流動相的組成來調(diào)節(jié)樣品在色譜柱的保留值和選擇性，從而使不同樣品得到分離。
液相色譜法的應用范圍十分廣泛，對樣品的適用性廣，不受分析對象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，幾乎所有的化合物包括高沸點、極性、離子型化合物和大分子物質(zhì)均可用液相色譜法分析測定，因而彌補了氣相色譜法的不足。在目前已知的有機化合物中，可用氣相色譜分析的約占20%，而80%則需用液相色譜來分析。
液相色譜基線漂移的原因
?。?）柱的溫度波動。即使是微小的溫度變化也會導致基線波動。通常影響差異檢測器、電導檢測器、UV檢測器或其它光電類檢測器的較低靈敏度。
?。?）色譜流動相不均勻流動相條件變化，引起的基線漂移大于溫度變化引起的基線漂移。
（3）污染或氣體循環(huán)池。
（4）探測器出口堵塞。（高壓導致循環(huán)水池窗口的爆裂，產(chǎn)生噪聲基線）。
?。?）不正確的流量比或流量變化。
?。?）柱的平衡是緩慢的，特別是當移動相發(fā)生變化時。
?。?）由低質(zhì)量的溶劑污染、變質(zhì)或制備。
（8）個樣品具有較強的保留力（高K‘值）至汕頭峰。
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