葡聚糖凝膠分離的化學(xué)穩(wěn)定性和物理穩(wěn)定性
葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠,含有大量的羥基,很容易在水中和電解質(zhì)溶液中溶脹。G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯(lián)度,因此它們的溶脹度和分級(jí)分離范圍也有所不同。葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。
葡聚糖凝膠有不同的粒度。超細(xì)級(jí)的葡聚糖凝膠是用于需要分辨率的柱色譜和薄層色譜。粗級(jí)和中級(jí)的凝膠用于制備性色譜過(guò)程,可在較低的壓力下獲得較高的流速。另外,粗級(jí)也可用于批量工藝。
下面我們看看葡聚糖凝膠的化學(xué)穩(wěn)定性和物理穩(wěn)定性:
1、化學(xué)穩(wěn)定性
葡聚糖凝膠不溶于一切溶劑(除非它被化學(xué)降解)。它在水、鹽溶液、堿和弱酸性溶液中都是穩(wěn)定的,在強(qiáng)酸中凝膠骨架的糖苷鍵被水解。長(zhǎng)期接觸氧化劑將破壞凝膠,因而應(yīng)避免使用。
2、物理穩(wěn)定性
葡聚糖凝膠并不熔融,可以在濕態(tài)、中性PH進(jìn)行滅菌或在高壓滅菌器120℃、30分鐘而不影響它的色譜性質(zhì)。干態(tài)的凝膠加熱至120℃以上將開(kāi)始焦糖化。葡聚糖凝膠的機(jī)械強(qiáng)度取決于交聯(lián)度。
葡聚糖凝膠的使用說(shuō)明:
?。?) 選擇條件:
梯度洗脫在葡聚糖凝膠 LH-20使用中并不象在正相柱層析中那么重要。首先你的樣品須要能溶解在盡量少量的洗脫劑中。極性在的用甲醇水系統(tǒng);極性小者一般用不含水的系統(tǒng),常用正己烷二-氯-甲烷甲醇系統(tǒng)。
(2)飽和層析柱:
用洗脫劑將凝膠搖勻,直立柱身,讓其自然沉降,此時(shí)要防止氣泡留在其中。至少半小時(shí)打開(kāi)開(kāi)關(guān),流出幾個(gè)柱體種的洗脫劑,目的是使其膨脹在正確比例的洗脫劑中。
(3)樣品處理:
用盡量少的洗脫劑溶解樣品,常壓過(guò)濾。
?。?)濕法上柱:
這也是要有技巧的步驟。
(5)洗脫:
控制流速,一般1drop/s以下,可參見(jiàn)廠家的一些參數(shù);必要時(shí)更改極性(很多時(shí)一個(gè)極性就可以將樣品洗脫完畢)。
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