由此可見(jiàn)，想要提取到高質(zhì)量的RNA并非易事。今天，小翌主要從樣本選擇、樣本采集與保存、RNA提取這三個(gè)方面來(lái)闡述RNA提取過(guò)程需注意的關(guān)鍵要點(diǎn)，以輔助后續(xù)的qPCR實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。

常見(jiàn)的RNA提取方法

1.   沉淀法

? 原理

Trizol中含有苯酚、異硫氰酸胍、β-巰基乙醇，可裂解樣本釋放核酸，并抑制RNase活性。加入氯仿離心分層，收集上清，經(jīng)異丙醇沉淀得到總RNA

? 特點(diǎn)

得率高，樣本適用性廣泛，但是純度相對(duì)較低

? 推薦貨號(hào)

Trieasy (貨號(hào)：10606)

2.  離心柱法




? 原理

高鹽吸附、低鹽洗脫

? 特點(diǎn)

得率高 ，樣本適用性廣泛，但是純度相對(duì)較低

? 推薦貨號(hào)

培養(yǎng)細(xì)胞RNA提取試劑盒(貨號(hào)：19231）
組織/細(xì)胞RNA提取試劑盒（貨號(hào)：19221）
多糖多酚植物RNA提取試劑盒（貨號(hào)：19292）

在此，給大家介紹一款11min即可完成培養(yǎng)細(xì)胞RNA提取的的柱式提取試劑盒：培養(yǎng)細(xì)胞RNA提取試劑盒（19231）。

? 產(chǎn)品特點(diǎn)：

? 案例展示：

使用培養(yǎng)細(xì)胞RNA提取試劑盒（19231）和O品牌常規(guī)細(xì)胞/組織RNA提取試劑盒各提取2份293T細(xì)胞（10^6個(gè)細(xì)胞）的總RNA。結(jié)果顯示，該試劑盒提取到的目標(biāo)RNA產(chǎn)量一致，但純度更高，如表1和圖2。

表1. Nanodrop測(cè)定RNA濃度

備注：Y1，Y2代表培養(yǎng)細(xì)胞RNA提取試劑盒（19231）；O1，O2代表O品牌常規(guī)細(xì)胞/組織RNA提取試劑盒

▲ 圖2a.hGAPDH擴(kuò)增結(jié)果

▲ 圖2b.hBC6擴(kuò)增結(jié)果

圖2. 培養(yǎng)細(xì)胞RNA提取試劑盒的定量結(jié)果與O品牌基本一致。取1 μL洗脫液反轉(zhuǎn)錄，以cDNA的10倍稀釋液為模板，定量測(cè)試 hGAPDH  和 hBC6  2個(gè)基因

綜上，小翌從樣本選擇、樣本采集與保存、RNA提取這三個(gè)方面闡述了提取高質(zhì)量RNA的關(guān)鍵要點(diǎn)，下期小翌將講解RNA質(zhì)量評(píng)估以及RNA降解對(duì)qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響等方面的內(nèi)容，我們下期不見(jiàn)不散~

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