小鼠雜交瘤細胞；EphB3培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。

2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二、細胞處理：

1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。

2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

BY4742 Chemically Competent Cell100μl×10支

R5421 Chemically Competent Cell100μl×10支

EGY48 Chemically Competent Cell100μl×10支

EGY194 Chemically Competent Cell100μl×10支

EGY188 Chemically Competent Cell100μl×10支

EGY40 Chemically Competent Cell100μl×10支

RFY206 Chemically Competent Cell100μl×10支

Y190 Chemically Competent Cell100μl×10支

YM4271 Chemically Competent Cell100μl×10支

GV3101感受態(tài)細胞(化學轉化法或熱激法）10×100ul

GV3101感受態(tài)細胞(化學轉化法或熱激法）50×100ul

GV3101(pSoup)感受態(tài)細胞(化學轉化法或熱激法）10×100ul

GV3101(pSoup)感受態(tài)細胞(化學轉化法或熱激法）50×100ul

GV3101(pSoup-p19)感受態(tài)細胞(化學轉化法或熱激法）10×100ul

GV3101(pSoup-p19)感受態(tài)細胞(化學轉化法或熱激法）50×100ul

EHA105感受態(tài)細胞(化學轉化法或熱激法）10×100ul

EHA105感受態(tài)細胞(化學轉化法或熱激法）50×100ul

EHA105(pSoup)感受態(tài)細胞(化學轉化法或熱激法）10×100ul

EHA105(pSoup)感受態(tài)細胞(化學轉化法或熱激法）50×100ul

AGL1感受態(tài)細胞(化學轉化法或熱激法）10×100ul