使用凍存管儲(chǔ)存樣本時(shí)，嚴(yán)格要求應(yīng)把凍存管放入液氮的氣相層或冰箱中保存！如果凍存管儲(chǔ)存于液氮液體中，液氮有一定幾率會(huì)滲入凍存管內(nèi)部，復(fù)蘇時(shí)液氮?dú)饣瘜?dǎo)致管內(nèi)外壓力不平衡，這樣極易造成凍存管的炸裂，并具有生物危害性。

操作凍存管復(fù)蘇，全程使用安全防護(hù)設(shè)備，建議穿實(shí)驗(yàn)服、戴棉質(zhì)手套且在安全的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上進(jìn)行操作。條件允許情況下，請(qǐng)佩戴護(hù)目鏡或防護(hù)面罩。由于夏季室內(nèi)溫度會(huì)高于冬季，請(qǐng)格外小心。

凍存細(xì)胞儲(chǔ)存過(guò)程中，凍存管的冷凍溫度須均勻。不均勻的受凍將會(huì)導(dǎo)致冰塞的產(chǎn)生，冰塞會(huì)抑制兩側(cè)的液體溫度傳遞進(jìn)而產(chǎn)生危險(xiǎn)的高壓力并導(dǎo)致凍存管受損。

凍存的樣本量不要超過(guò)凍存管要求的工作體積。

凍存管使用不當(dāng)， 會(huì)有爆、生物安全威脅及人身傷害等風(fēng)險(xiǎn)。

細(xì)胞凍存流程

用預(yù)熱過(guò)的 PBS 對(duì)細(xì)胞進(jìn)行沖洗，棄去 PBS 后，加入含 EDTA的胰酶消化液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行消（薄地覆蓋表面即可，濃度須 根據(jù)不同的細(xì)胞系進(jìn)行調(diào)整）。37 ℃消化 細(xì)胞 3–5分鐘，不可過(guò)度消化。一旦細(xì)胞從底部脫離，即可用含血清培養(yǎng)基終止消化并吸管輕吹打以重懸細(xì)胞 。離心細(xì)胞重懸液，棄上清。用適當(dāng)體積含血培養(yǎng)基 重懸細(xì)胞。將細(xì)胞重懸液以 1:11 比例與凍存液 進(jìn)行混合后轉(zhuǎn)移至凍存管中。細(xì)胞的濃度應(yīng)為 1–5 ×106 細(xì)胞 /ml。含有細(xì)胞的凍存管須按照1度/min的冷卻速率進(jìn)行凍。將凍存管插在含異丙醇的凍存盒小室并放置在 -70 ℃的冰箱中可以實(shí)現(xiàn)上述要求。如果凍存液中含有其他類型的樣品時(shí)，則需要將凍存管在 .20 ℃，-70 ℃或者液氮的氣相層進(jìn)行直接凍存。