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單克隆篩選方法和途徑介紹

來源:Bio-Techne   2021年08月21日 12:33  
  單克隆篩選是將免疫小鼠的脾細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞結(jié)合成雜交瘤細(xì)胞,是新一代細(xì)胞克隆篩選和挑取技術(shù),篩選系統(tǒng)能夠更少時(shí)間里,快速高效篩選挑取雜交瘤克隆,建立穩(wěn)定細(xì)胞株,干細(xì)胞及特殊表面標(biāo)記細(xì)胞挑取及昆蟲細(xì)胞篩選挑取。
  篩選方法有有限稀釋法,半固體培養(yǎng)基挑選法,以及流式細(xì)胞術(shù)挑選法等,這其中有好多需要關(guān)注的點(diǎn),例如挑選細(xì)胞的參數(shù),挑選方法本身對(duì)細(xì)胞的損傷等,所以說,一個(gè)高效的篩選方法絕對(duì)能讓工作效率提高好幾倍。
  有限稀釋法是目前常用的一種常規(guī)方法,這種方法篩選細(xì)胞的好處就是基本上不會(huì)傷害細(xì)胞,整個(gè)過程中細(xì)胞所經(jīng)歷的,也僅僅是在移液槍頭中的短暫停留,因此幾乎是零損傷。不過,這種方法的弊端也是顯而易見,就是效率問題。
       首先是鋪板效率,雖然不到一分鐘能將一塊96孔板鋪滿,但是一般來說96孔中有細(xì)胞的概率在2/3左右,其中單個(gè)細(xì)胞的概率就更小了,這些細(xì)胞要經(jīng)過一段時(shí)間的生長,抗體分泌之后,在其上清液中去檢測(cè)抗體含量,流程耗時(shí)太長,且效率低下,但是在沒有設(shè)備的時(shí)候,這還是目前好的選擇。

  其次,半固體培養(yǎng)基篩選克隆可以從明場和熒光方面觀察克隆形成情況以及克隆表達(dá)量相關(guān)情況,不過類似設(shè)備一般價(jià)格比較昂貴,使用成本較高,通量較低。因此,慢慢地很多用戶都不采用類似的設(shè)備進(jìn)行雜交瘤的單克隆篩選。

       另外,就是使用流式細(xì)胞分選儀進(jìn)行單克隆篩選。流式作為細(xì)胞檢測(cè)分選的常用設(shè)備,也有用戶拿來做單克隆篩選。流式分選單細(xì)胞的速度很快,差不多2min左右可以鋪完一塊96孔板;同時(shí),也可以通過熒光篩選細(xì)胞,將表達(dá)量高的細(xì)胞篩選下來。但是流式分選在這個(gè)應(yīng)用上也有不足之處,主要是:1. 流式的分選壓力較大,一般有70psi左右的鞘液壓力施加在細(xì)胞上,導(dǎo)致分選后的細(xì)胞活性差,往往較難生長;2. 流式共用管路,導(dǎo)致細(xì)胞之間存在交叉污染;3. 流式操作復(fù)雜,開始分選前往往需要一個(gè)多小時(shí)進(jìn)行儀器調(diào)節(jié)校準(zhǔn);4. 儀器體積較大,無法整機(jī)放置于超凈臺(tái),容易造成染菌等情況。

       Namocell單細(xì)胞分離儀為單克隆篩選提供了一個(gè)更好的選擇。一次性芯片,保證樣本之間*隔離;儀器體積小巧,可置于超凈臺(tái)中 高效分選:96孔板分選不到1min,384孔板4min以內(nèi),單克隆率超過95%輕松分選:儀器操作簡單,無需操作維護(hù)。


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