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一文Get原代細(xì)胞培養(yǎng)秘笈

來源：翌圣生物科技（上海）股份有限公司 2021年08月27日 16:00

概述

原代細(xì)胞（Primary Cell）是指從機(jī)體的組織或器官經(jīng)胰蛋白酶、膠原酶、中性蛋白酶或其它的方法獲得單個細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體環(huán)境培養(yǎng)的細(xì)胞。

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▲ 圖1.原代組織細(xì)胞培養(yǎng)（源于網(wǎng)絡(luò)）

那原代細(xì)胞與細(xì)胞系有什么區(qū)別呢？小翌給你答案，見下表：

特性	原代細(xì)胞	細(xì)胞系
增殖能力	較弱	強(qiáng)
繁殖代數(shù)	一般只能傳10代以內(nèi)	無限增殖，50代左右
遺傳物質(zhì)完整性	遺傳物質(zhì)未改變	遺傳物質(zhì)發(fā)生改變
生物特性	臨床樣本	偏離臨床樣本
培養(yǎng)容易程度	比較復(fù)雜	簡單，易操作

原代細(xì)胞培養(yǎng)：由于原代細(xì)胞生長緩慢，繁殖一定的代數(shù)停止生長（一般10代以內(nèi)）。所以一般認(rèn)為：培養(yǎng)的原代的第1和傳代到第10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。

在原代細(xì)胞培養(yǎng)的過程中，支原體污染發(fā)生的頻率很高，但常常為人所忽視，原因在于支原體污染的培養(yǎng)液可能不發(fā)生混濁的現(xiàn)象，這就導(dǎo)致了很難被肉眼所觀察到。

原代細(xì)胞培養(yǎng)如何取材

▍ 皮膚和黏膜

主要取皮片，面積一般2-4cm²

▍ 內(nèi)臟和實體瘤

? 無菌環(huán)境；

? 熟悉所需組織的類型和部位；

? 要避開破潰、壞死、液化部分，以防污染、盡量去除混雜的結(jié)締組織。

▍ 血液細(xì)胞

? 一般多抽取靜脈外周血、或從淋巴組織中分離細(xì)胞；

? 取材時應(yīng)注意抗凝。

▍ 骨髓、羊水、胸/腹水細(xì)胞

嚴(yán)格無菌、注意抗凝、還要盡快分離培養(yǎng)、離心后，用無鈣、鎂PBS洗兩次，再用培養(yǎng)液洗一次后即可培養(yǎng)，不宜低溫存放。

▍ 動物組織取材-鼠胚組織

? 用引頸或氣管窒息致死法處死孕期合適的動物；

? 將其浸泡在含75%酒精的燒杯中，5分鐘后取出動物；

? 在消毒過得木板上可用無菌的圖釘固定四肢，切開皮膚；

? 用無菌操作法解剖取胚。

▍ 動物組織取材-幼鼠胚腎/肺

? 幼鼠采用上述方法處死消毒后；

? 腹部朝上固定在木板上，先切開游離毛皮并拉開至兩側(cè)；

? 采用無菌法打開胸腔取肺，或從背部打開腹腔取腎。

▍ 雞、鴨、鳥類胚胎組織

? 取孵化至適當(dāng)胚齡（9-12天）的胚蛋，用照蛋燈在暗處燈檢，若有豐富血管、胚體有運(yùn)動的胚蛋、說明胚體發(fā)育良好，并用有色筆劃出氣室和胚體位置；

? 將胚蛋至于蛋架上，先將溫水清洗蛋殼，再用75%酒精棉球擦干，經(jīng)碘酒、75%酒精消毒后，在無菌條件下采用無菌法用剪刀或鑷子打開氣室，沿氣室邊緣去除蛋殼；

? 用眼科鑷子撕去殼膜，暴露出雞胚；

? 用彎頭鑷挑起胚頭，取出胚胎，放入無菌平皿中，解剖取材。

常見問題

Q1：細(xì)胞量太少，長不起來怎么辦？

有幾種辦法，如對沒消化完的組織塊反復(fù)消化，盡量多收集一些細(xì)胞；并且盡量傳代到小皿里，如6孔板都可以。若是細(xì)胞仍太少，應(yīng)耐心等待，盡量不要傳代，只換液。

Q2：皮膚組織作為正常組織，與腫瘤組織分離主要區(qū)別在哪里？

首先，皮膚組織需要用中性分離酶dispaseII將表皮分離出來；其次，在消化時，用的是胰酶，而非膠原酶，并且胰酶的濃度用的是0.05%，而不是0.25%。

Q3：細(xì)胞難以貼壁怎么辦？

為了盡快促進(jìn)細(xì)胞貼壁，可以提前1h將0.5%的明膠鋪于培養(yǎng)板。另外，如果細(xì)胞被污染了肯定不貼壁，建議做支原體檢測，結(jié)果如果是陽性，立即加入支原體去除試劑，挽救您的細(xì)胞，咱們小翌可以為你的細(xì)胞提供護(hù)航！

精品推薦

▍ Yeasen 40612 只要一步法即可檢測支原體的存在

Yeasen一步法恒溫支原體檢測試劑采用的等溫擴(kuò)增技術(shù)，在顏色判別方面具有更強(qiáng)的辨識度，由藍(lán)紫色（陰性）向天藍(lán)色（陽性）的變，更利于肉眼的判別，增加了防污染組分，杜絕假陽性現(xiàn)象的存在。

▲ 圖2.一步法支原體檢測操作流程

▍ 結(jié)果是陽性，別怕！Yeasen 40607 幫你搞定

MycAway^TM 支原體去除試劑（1000×）是一種混合制劑，可通過抑制 DNA 和支原體生長所必須的相關(guān)蛋白合成來取得良好的支原體清除效果且對細(xì)胞無傷害，挽救您的細(xì)胞，減少因支原體污染帶來的損失。

去除前

去除后

▲ 圖3.Yeasen MycAway^TM 支原體去除效果的展示

▍ 支原體去除試劑的特點(diǎn)

? 毒性低：對細(xì)胞毒性小，不影響后續(xù)細(xì)胞實驗，如細(xì)胞活力檢測和細(xì)胞轉(zhuǎn)染等；

? 穩(wěn)定性強(qiáng)：-20℃試劑能較長時間保存并保持高效用；

? 操作簡單：只需將產(chǎn)品添加至支原體污染的培養(yǎng)基中孵育即可；

? 起效快：最快3天即可見效；

? 去除范圍廣：能去除實驗室絕大多數(shù)支原體類型。

▲ 圖4.支原體去除試劑細(xì)胞毒性檢測圖示

產(chǎn)品信息

*線下*正在進(jìn)行，咨詢當(dāng)?shù)劁N售

類別	產(chǎn)品	貨號	規(guī)格
支原體檢測	GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit GMyc-PCR支原體檢測試劑盒	40601ES10/20	10/20 assays
支原體檢測	MycAway™ Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit 一步法快速支原體檢測試劑盒	40612ES25/60	25/100T
支原體去除試劑	MycAway™ Spray (Ready-to-use) 支原體噴霧劑（即用型）	40605ES02/03	1 / 2×500 mL
支原體去除試劑	MycAway™ Treatment (1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent MycAway™ 支原體去除試劑（1000×）	40607ES03/08	1/ 5×1mL
支原體預(yù)防試劑	MycAway™ Prophylactic (2000×)-Mycoplasma Prevention MycAway™ 支原體預(yù)防試劑（2000×）	40608ES03/08	1/5×1 mL
	MycGuard™-1 Solution (100×), for Disinfecting Water Bath of CO2 Incubator 細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤1號消毒衛(wèi)士	40609ES60	100 mL
	MycGuard™-2 Solution (500×), for Disinfecting Ordinary Water Bath 水浴鍋2號消毒衛(wèi)士	40610ES60	100 mL

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