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介紹常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)的兩個類型

來源:上海瑋馳儀器有限公司   2021年08月29日 23:52  
 
  轉(zhuǎn)染(transfection)是真核細胞在一定條件下主動或被動導(dǎo)入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。從本質(zhì)上講,和轉(zhuǎn)化沒有根本的區(qū)別。無論是轉(zhuǎn)染還是轉(zhuǎn)化,其關(guān)鍵因素都是用氯化鈣處理大腸桿菌細胞,以提高細胞膜的通透性,從而使外源DNA分子能夠容易進入細胞內(nèi)部。所以在習慣上,人們往往也通稱轉(zhuǎn)染為廣義的轉(zhuǎn)化。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染兩大類。
  常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類,一類是瞬時轉(zhuǎn)染,一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達,但通常只持續(xù)幾天,多用于啟動子和其它調(diào)控元件的分析。一般來說,超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高,在轉(zhuǎn)染后24-72小時內(nèi)(依賴于各種不同的構(gòu)建)分析結(jié)果,常常用到一些報告系統(tǒng)如熒光蛋白,β半乳糖苷酶等來幫助檢測。后者也稱穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,外源DNA既可以整合到宿主染色體中,也可能作為一種游離體(episome)存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小,大約1/104轉(zhuǎn)染細胞能整合,通常需要通過一些選擇性標記,如來氨丙基轉(zhuǎn)移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反復(fù)篩選,得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細胞系。
  轉(zhuǎn)染技術(shù)的選擇對轉(zhuǎn)染結(jié)果影響也很大,許多轉(zhuǎn)染方法需要優(yōu)化DNA與轉(zhuǎn)染試劑比例,細胞數(shù)量,培養(yǎng)及檢測時間等。

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