ATP檢測試劑盒(ATP Assay Kit)可以用于檢測普通溶液、細胞或組織內(nèi)的ATP(adenosine 5'-triphosphate)水平。細胞和組織樣品一步裂解即可完成樣品制備,檢測靈敏度高達1nmol/L,化學(xué)發(fā)光可以持續(xù)穩(wěn)定達30分鐘,并且獲得的樣品還可以同時進行Western檢測。
ATP、作為最重要的能量分子在細胞的各種生理、病理過程中起著重要作用。ATP水平的改變、會影響細胞的功能,通常細胞在凋亡、壞死或處于一些毒性狀態(tài)下,ATP水平會下降,而高葡萄糖刺激等對于一些細胞可以上調(diào)細胞內(nèi)ATP水平。通常ATP水平的下降表明線粒體的功能受損或下降,在細胞凋亡時ATP水平的下降通常和線粒體的膜電位下降同時發(fā)生。
樣品制備非常簡單。本試劑盒提供了可以用于細胞和組織裂解的ATP檢測裂解液,簡單裂解后即可用于ATP檢測。無需進行高氯酸或(TCA)抽提,或樣品裂解后的煮沸等繁瑣操作。
本試劑盒根據(jù)螢火蟲熒光素酶(firefly luciferase)催化熒光素產(chǎn)生熒光時需要ATP提供能量研制而成。 當(dāng)螢火蟲熒光素酶和熒光素都過量時,在一定的濃度范圍內(nèi)熒光的產(chǎn)生和ATP的濃度成正比。這樣就可以高靈敏地檢測溶液中的ATP濃度。本試劑盒在樣品體積為100微升時可以檢測濃度低達1nmol/L的ATP。而常規(guī)的細胞或組織裂解液中ATP的濃度僅為0.1-1μmol/L,一些常見細胞的細胞內(nèi)ATP水平約為10nmol/mg蛋白。并且本試劑盒的檢測濃度范圍非常大,檢測上限可以高達10μmol/L,并在5nmol/L-10μmol/L范圍內(nèi)可以形成良好的標準曲線。
本試劑盒進行了特殊的優(yōu)化設(shè)計,使檢測ATP時的化學(xué)發(fā)光非常穩(wěn)定。對于ATP標準曲線的檢測結(jié)果顯示,在開始反應(yīng)后10分鐘內(nèi)化學(xué)發(fā)光無明顯下降,開始反應(yīng)后30分鐘內(nèi)化學(xué)發(fā)光的下降不超過10%。
使用本試劑盒中的ATP檢測裂解液裂解獲得的細胞或組織樣品,不僅可以用于ATP檢測,還可用于檢測蛋白濃度、進行SDS-PAGE或一些常規(guī)的較易溶解蛋白的Western檢測。
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