第一步:取適量組織樣本剪碎,加冷PBS,用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體(或用液氮研磨),冰上靜置5分鐘,小心將上清吸入另一預冷的干凈離心管。
第二步:在4℃,500×g條件下離心2-3分鐘,棄上清。
第三步:每20ul細胞壓積中加入200μl冷的Buffer A,2ul蛋白酶抑制劑混合物,高速渦旋振蕩15秒,置冰上10分鐘。
第四步:再次高速渦旋振蕩5秒,然后在4℃,16000×g條件下離心5分鐘。
第五步:快速將上清吸入另一預冷的干凈離心管,即可得到胞漿蛋白,請置于冰上或-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>
第六步:在沉淀中加入200μl冷的Buffer B,2ul蛋白酶抑制劑混合物,高速渦旋振蕩15秒。
第七步:置冰上40分鐘,每隔10分鐘高速渦旋振蕩15秒。
第八步:在4℃,16000×g條件下離心10分鐘。
第九步:快速將上清吸入另一預冷的干凈離心管,即可得到核蛋白。
蛋白提取物請分裝后于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>
acmec核蛋白提取試劑盒操作簡單、方便,從培養(yǎng)細胞或新鮮組織中提核蛋白、整個過程只需60分鐘即可將核蛋白和漿蛋白從細胞中分離出來。
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