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近年來， RNA二代測序技術(shù)成為生命進(jìn)展和疾病診斷等領(lǐng)域的重要研究手段。但是，不同來源的樣本中的RNA種類占比具有極大的不均一性，如正常細(xì)胞中核糖體rRNA約占總RNA的90%?95%，血液中珠蛋白的mRNA約占總mRNA的76%以上，這些RNA的存在占據(jù)了大部分的測序數(shù)據(jù)，嚴(yán)重影響到低豐度RNA的檢測，提高了測序的成本。
圖1.人類組織/細(xì)胞RNA組成分布
因而在轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究中，rRNA的去除，對于實現(xiàn)RNA經(jīng)濟(jì)高效的測序至關(guān)重要。
目前國內(nèi)主要以RNase H酶消化法為主，特別對于部分RNA降解樣本（如FFPE樣本）RNA酶消法更能展現(xiàn)其優(yōu)勢。
圖2. rRNA去除（RNase H酶消化法）
翌圣生物自主研發(fā)的一步靶RNA去除快速技術(shù)可以在RNA建庫過程中快速去除不需要的rRNA和珠蛋白RNA，整個過程只需要3 min，一步操作。產(chǎn)品包括Hieff NGS® One-Step rRNA Removal Kit（一步法快速rRNA去除試劑盒）和Hieff NGS® One-Step Globin RNA Removal Kit（一步法快速珠蛋白RNA去除試劑盒）。
圖3. 逆轉(zhuǎn)錄阻礙探針法去除rRNA原理示意圖
一步靶RNA去除快速技術(shù)的原理是利用強(qiáng)結(jié)合能力的逆轉(zhuǎn)錄阻礙探針優(yōu)先封閉靶RNA，阻止逆轉(zhuǎn)錄酶通過逆轉(zhuǎn)錄阻礙探針鎖定的靶RNA位點(diǎn)，從而達(dá)到在逆轉(zhuǎn)錄過程中去除靶RNA的目的。
圖4.逆轉(zhuǎn)錄阻礙探針法在NGS建庫過程中快速去除靶RNA原理示意圖（僅需3min）
◎ 操作簡單（僅需一步加樣操作）
◎ 耗時3 min（無需額外的純化操作）
◎ 對非靶RNA保留完整、特異性強(qiáng)、效率高和基因檢出數(shù)高
圖5. 不同rRNA去除方法操作時間對比
圖6. 不同起始量RNA樣本中rRNA去除效率對比
【注】：為了獲得更好的建庫產(chǎn)量，我們建議1-100ng RNA投入量使用12259，100-1000ng RNA投入量使用12258。
圖7. 不同質(zhì)量度RNA樣本去除效率對比；左（DV200=70%）, 中（DV200=43%），右（DV200=12%）
圖8. 不同去除rRNA方法的基因檢出數(shù)比較
翌圣生物逆轉(zhuǎn)錄阻礙探針法獲得了國家知識產(chǎn)權(quán)局的發(fā)明zhuan利授權(quán)。任何在逆轉(zhuǎn)錄過程中利用逆轉(zhuǎn)錄阻礙探針混合物去除靶RNA的方法都應(yīng)屬于本zhuan利的保護(hù)范圍。
圖9. 發(fā)明zhuan利證書
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)品規(guī)格 |
Hieff NGS® One-Step rRNA Removal Kit（Human, 100-1000ng） | 12258ES08/24/96 | 8/24/96T |
Hieff NGS® One-Step rRNA Removal Kit（Human, 1-100 ng） | 12259ES08/24/96 | 8/24/96T |
Hieff NGS® One-Step Globin mRNA Removal Kit | 12260ES08/24/96 | 8/24/96T |
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