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如何選擇流式細(xì)胞儀

來源:北京眾仁鑫商貿(mào)有限公司   2021年10月22日 10:12  

自七十年代出現(xiàn)第一代流式細(xì)胞儀以來,隨著計(jì)算機(jī)技術(shù)、電子制造技術(shù)、激光技術(shù)及熒光素合成技術(shù)的不斷發(fā)展,現(xiàn)代流式細(xì)胞儀已今非昔比,制造工藝、功能、精確度有了質(zhì)的飛躍。


流式細(xì)胞儀生產(chǎn)廠商推出各種不同型號的流式細(xì)胞儀來滿足用戶的不同需要?,F(xiàn)生產(chǎn)流式細(xì)胞的廠商全球至少有六家,各廠商產(chǎn)品又有不同的系列,各具特點(diǎn)。如何從眾多的型號中挑選出zui適合自己的機(jī)型,我們還需從分析應(yīng)用出發(fā),評估自己的需求來決定什么樣的流式細(xì)胞儀*性價比、zui適合自己。


⑴、DNA倍體分析


DNA分析是流式細(xì)胞儀最初且是現(xiàn)在應(yīng)用*檢測項(xiàng)目。由于惡性細(xì)胞DNA含量通常與正常細(xì)胞不同,存在異倍體細(xì)胞,所以現(xiàn)有很研究評價異倍體細(xì)胞與腫瘤惡性度及其預(yù)后的關(guān)系。DNA含量檢測還可提供細(xì)胞周期方面的信息,這在細(xì)胞生物學(xué)中運(yùn)用很廣泛。

特別地,它可表示出細(xì)胞毒性藥物對細(xì)胞作用過程。這些DNA檢測還可與細(xì)胞表面標(biāo)志物標(biāo)記同時進(jìn)行,這樣在細(xì)胞混合培養(yǎng)中,可通常追蹤表達(dá)特異標(biāo)志物的細(xì)胞顯示其生長周期情況。所有方法都是基于染料能與核酸起特異的化學(xué)反應(yīng)并發(fā)射出熒光,常用的染料為PI,DAPI。


流式細(xì)胞儀要求:488nm光源,575nm濾光片。


⑵、細(xì)胞生存能力實(shí)驗(yàn)


使用Heochest 33342染料與DNA特異性結(jié)合,后因細(xì)胞活力不同染料的結(jié)合程度也各異,故可評估細(xì)胞的活性度。


流式細(xì)胞儀要求:360nm光源,455nm濾光片。


⑶、計(jì)數(shù)外周血中檢測網(wǎng)織紅細(xì)胞


使用TO染料能夠特異性地與RNA結(jié)合,結(jié)合系數(shù)高達(dá)3000,故具有很好的性價比。


流式細(xì)胞儀要求:488nm光源,525nm濾光片,液量絕對計(jì)數(shù)系統(tǒng)。


⑷、外周血、骨髓采集物中CD34陽性干細(xì)胞計(jì)數(shù),臨床上用于骨髓移植前干細(xì)胞數(shù)理的測定


使用標(biāo)準(zhǔn)ISHAG方案,需要DNA或其他核染料占用FITC通道,PE標(biāo)記CD34抗體,PE-CY5標(biāo)記CD45抗體。


流式細(xì)胞儀要求:488nm光源,525nm、575nm、675nm濾光片,液量絕對計(jì)數(shù)系統(tǒng)。


⑸、交叉淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)


檢測識別供體血清中免疫球蛋白與受體粒細(xì)胞之間是否存在反應(yīng)有著重要臨床意義,因?yàn)檫@種反應(yīng)會導(dǎo)致移植后發(fā)熱、移植后肺損傷及免疫性粒細(xì)胞缺乏癥。流式細(xì)胞儀可檢測全血樣本與血清孵育后粒細(xì)胞上結(jié)合的人免疫球蛋白。FITC標(biāo)記人免疫球蛋白抗體、PE標(biāo)記粒細(xì)胞表面標(biāo)志物、PE-CY5標(biāo)記HLA抗體。


流式細(xì)胞儀要求:488nm光源,525nm、575nm、675nm濾光片。


⑹、血小板自身抗體檢測


血小板自身抗體識別人血小板抗原,會引起各種臨床相關(guān)癥狀,如新生兒自免性血小板減少癥、輸血后紫癜、難治性血小板減少。流式細(xì)胞可快速準(zhǔn)確地檢測血小板自身抗體。FITC標(biāo)記抗人免疫球蛋白抗體、PE標(biāo)記識別血小板抗體。


流式細(xì)胞儀要求:488nm光源,525nm、575nm濾光片。


⑺、移植交叉配型


原細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn),主要用于避免移植物超急性排拆反應(yīng)。流式細(xì)胞儀用于監(jiān)測T或B細(xì)胞是否受到受體血清中免疫球蛋白攻擊,作為HLA配型前的預(yù)實(shí)驗(yàn)。流式細(xì)胞儀因其高精確性已成為該領(lǐng)域內(nèi)的金標(biāo)準(zhǔn)。FITC標(biāo)記抗人免疫球蛋白抗體、PE標(biāo)記識別T細(xì)胞CD3或B細(xì)胞CD29抗體。


儀器要求:488nm光源,525nm、575nm濾光片。


⑻、檢測細(xì)胞經(jīng)抗原或細(xì)胞有絲分裂刺激后活化效應(yīng)


淋巴細(xì)胞早期活化指標(biāo)CD69可用來檢測免疫治療效果。流式細(xì)胞使用三色分析可監(jiān)測淋巴細(xì)胞各亞群活化情況:FITC標(biāo)記的CD3抗體、PE標(biāo)記的CD8抗體、PE-CY5標(biāo)記的CD69抗體。


流式細(xì)胞儀要求:488nm光源,525nm、575nm、575nm濾光片。


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