注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

規(guī)格：50T/48S

紫外分光光度法

產(chǎn)品簡介：

PAL（EC4. 3 1 5）廣泛存在于各種植物和少數(shù)微生物中，是植物體內(nèi)苯丙烷類代謝的關(guān)鍵酶， 與一些重要的次生物質(zhì)如木質(zhì)素、異黃酮類植保素、黃酮類色素等合成密切相關(guān)，在植物正常生長發(fā)育和抵御病菌侵害過程中起重要作用。PAL 催化 L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在 290nm 處有最大吸收值，通過測(cè)定吸光值升高速率計(jì)算 PAL 活性。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：

紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1ml 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存； 

試劑一：液體 40mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×3 瓶，4℃保存，臨用前每瓶加入 4mL 雙蒸水充分溶解待用；現(xiàn)配現(xiàn)用。

試劑三：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；

操作步驟：

一、粗酶液提?。?/span>

稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿。10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

二、測(cè)定操作表：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 290nm，蒸餾水調(diào)零。

2、操作表

混勻，靜置 10min 后，用對(duì)照管調(diào)零，290nm 處記錄測(cè)定管吸光值 A (A=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)。

PAL 活性計(jì)算：

a. 按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白在每 ml 反應(yīng)體系中每分鐘使 290nm 下吸光值變化 0.1 定義為一個(gè)酶活力單位。

PAL（U/mg prot）=A×反應(yīng)總體積（1040µL）÷樣本體積（20µL）÷反應(yīng)時(shí)間(30min)÷0.1 ÷蛋白濃度（mg/mL）=17.3×A ÷蛋白濃度（mg/mL）

a. 按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每 g 組織在每 ml 反應(yīng)體系中每分鐘使 290nm 下吸光值變化 0.1 定義為一個(gè)酶活力單位。

PAL（U/g  鮮重）=A×反應(yīng)總體積（1040µL）÷﹝樣本鮮重（g）×樣本體積（20µL）÷V 樣總（1mL）﹞

÷反應(yīng)時(shí)間(30min)÷0.1 =17.3×A ÷樣本鮮重（g）