銳拓溶出儀的客戶在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)手動(dòng)取樣與自動(dòng)取樣的結(jié)果不一致，銳拓應(yīng)用技術(shù)部以DOE實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)協(xié)助客戶進(jìn)行偏差調(diào)查。

本文基于此次調(diào)查報(bào)告（RT-R2005001）改編而成，我們希望通過本文向各位介紹正確的溶出過濾方式。亦歡迎各位關(guān)注銳拓儀器的公眾號(hào)，在線與我們的技術(shù)人員探討您所遇到的問題。

1. 目的

為銳拓客戶提供調(diào)查服務(wù)，調(diào)查L制劑溶出實(shí)驗(yàn)過程中手動(dòng)取樣與自動(dòng)取樣不一致的原因，并提供符合GMP要求的調(diào)查報(bào)告。

2. 實(shí)驗(yàn)參數(shù)

溶出裝置：槳法

溶出介質(zhì)：純水, 900 mL

溫度：37℃ ± 0.5℃

轉(zhuǎn)速：50 RPM

取樣時(shí)間：5，10，15，20，30，45 min

取樣體積：10 mL

柱狀取樣濾芯：孔徑：30 μm

注射式過濾器：聚醚砜（PES）；直徑：25 mm；孔徑：0.45 μm

3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 手動(dòng)取樣和自動(dòng)取樣結(jié)果的對(duì)比

每個(gè)溶出杯均同時(shí)進(jìn)行手動(dòng)取樣和自動(dòng)取樣。手動(dòng)取樣針和自動(dòng)取樣針前端均安裝柱狀取樣濾芯，后端使用注射式過濾器進(jìn)行二級(jí)過濾。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在正確的過濾方式下，手動(dòng)取樣和自動(dòng)取樣的釋放度結(jié)果基本一致。

3.2 不同手動(dòng)取樣過濾方式的差異

每個(gè)溶出杯同時(shí)進(jìn)行手動(dòng)取樣，取樣后立即同步使用以下 3 種方式進(jìn)行過濾：

（1）取樣針前端不安裝柱狀取樣濾芯，使用同一個(gè)注射式過濾器過濾所有取樣時(shí)間點(diǎn)的樣品。

（2）取樣針前端不安裝柱狀取樣濾芯，每個(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)使用新的注射式過濾器過濾樣品。

（3）取樣針前端安裝柱狀取樣濾芯。后端不使用注射式過濾器。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同過濾方式的結(jié)果差異很大：

（1）取樣針前端不安裝濾芯的溶出結(jié)果＞取樣針前端安裝濾芯的溶出結(jié)果。

（2）重復(fù)使用注射式過濾器的溶出結(jié)果＞每次更換注射式過濾器的溶出結(jié)果。

4. 結(jié)果分析

這里應(yīng)首先指出，所有過濾方式均經(jīng)過確認(rèn)，取樣前過濾器均已經(jīng)充分飽和，不會(huì)吸附樣品的主藥成分。

根據(jù)樣品的釋放特征，我們認(rèn)為造成結(jié)果差異的原因是：過濾時(shí)，樣品顆粒在注射式過濾器中復(fù)溶所致。

樣品進(jìn)入溶出介質(zhì)后會(huì)迅速崩解，產(chǎn)生大量顆粒，這些顆粒密度較輕，會(huì)隨著槳葉的攪動(dòng)漂散到溶出介質(zhì)的上層。如果取樣針前端沒有安裝柱狀取樣濾芯，在取樣過程中就很容易抽取到大量的樣品顆粒。

取樣后使用注射式過濾器過濾樣品溶液時(shí)，我們一般會(huì)先排掉一部分濾液飽和濾頭，此時(shí)已經(jīng)有一部分樣品顆粒積聚在濾頭上。后續(xù)把樣品溶液*過濾時(shí)，顆粒會(huì)繼續(xù)在濾頭上積聚。加上樣品釋放速度快，積聚在濾頭上的顆粒會(huì)在過濾過程中持續(xù)釋放主藥成分，導(dǎo)致收集到的溶液濃度偏大，最終引起溶出結(jié)果偏高。

從而，上述的實(shí)驗(yàn)情況就可以進(jìn)行合理的解析：

（1）重復(fù)使用注射式過濾器時(shí)，樣品顆粒會(huì)持續(xù)在同一個(gè)注射式過濾器積聚，其積聚程度遠(yuǎn)高于每次更換過濾器的情況，從而導(dǎo)致其收集到的溶液濃度更大。即使每次過濾時(shí)均舍去前面濾液，也明顯無(wú)法排除前期積聚的樣品顆粒持續(xù)釋放主藥成分的干擾。

（2）隨著溶出實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行，溶出介質(zhì)里漂浮顆粒中的主藥成分會(huì)逐漸釋放進(jìn)入溶出介質(zhì)中。測(cè)試時(shí)間越長(zhǎng)，樣品顆粒中殘留的主藥成分越少，其取樣后堆積在濾頭中復(fù)溶出來的主藥成分也越少。所以取樣時(shí)間越后，三種過濾方式的差異越少。

唯有同時(shí)在取樣針前端安裝柱狀取樣濾芯排除制劑L顆粒的干擾，手動(dòng)取樣的結(jié)果才可以與自動(dòng)取樣的結(jié)果一致。 

5. 結(jié)論

不正確的過濾方式可能會(huì)過高地估計(jì)了藥物的實(shí)際溶出效果，高估藥物的體外溶出可能導(dǎo)致仿制藥物在人體內(nèi)的實(shí)際藥物濃度低于預(yù)計(jì)，增加BE不通過的風(fēng)險(xiǎn)，盡管這種風(fēng)險(xiǎn)僅存在于某些特定藥物中（例如本文中的制劑L）。

基于上述原因，溶出度儀應(yīng)具有兩級(jí)的過濾器設(shè)計(jì)，以充分降低不能正確過濾所帶來的風(fēng)險(xiǎn)。銳拓儀器RT600系列及RT612系列溶出儀均具有原生二級(jí)過濾器設(shè)計(jì)，以充分支持用戶的溶出度測(cè)試工作。