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高通量測序（Next Generation Sequencing，NGS）近年來飛速發(fā)展，在各個(gè)領(lǐng)域已被廣泛應(yīng)用。而文庫的制備是NGS技術(shù)中極為重要的步驟。所謂文庫制備（Library Preparation）就是在DNA的片段兩端連接上特定序列的接頭的過程，讓文庫可以在高通量測序平臺(tái)上進(jìn)行測序。
文庫構(gòu)建的最終目的在于成功測序，并獲得序列信息。那么如何判定這個(gè)文庫能否上機(jī)測序呢？想必這是大家一致關(guān)注的問題。
文庫的數(shù)量和質(zhì)量是能否成功測序的關(guān)鍵。文庫的濃度和文庫分布是評(píng)價(jià)文庫質(zhì)量的兩個(gè)關(guān)鍵參數(shù)。
文庫構(gòu)建完成后，我們首*行文庫濃度的測定。核酸定量的方式有多種，但基于紫外分光光度的測定方法相對(duì)不夠精準(zhǔn)定量，比如Nanodrop或酶標(biāo)儀，我們推薦使用染料法進(jìn)行核酸定量，在文庫構(gòu)建中比較常用的核酸定量儀器是Thermo Life Qubit 3.0熒光定量儀。
如果文庫濃度符合上機(jī)需求，接下來我們用Agilent 2100生物分析儀來檢測其片段大小是否符合預(yù)期，其峰值大小應(yīng)該是目的片段加上接頭序列的總長度。
除ATAC、cfDNA和small RNA等特殊文庫外，一般情況下，好的文庫應(yīng)該呈現(xiàn)出單一的、圓滑的峰且接近正態(tài)分布，并且文庫中小于280 bp和大于1000 bp的片段占比不要過大（如大于20%）都可上機(jī)測序。
圖1：常規(guī)文庫2100峰型圖
圖2：cfDNA文庫2100峰型圖
圖3：ATAC文庫2100峰型圖
圖4：文庫峰型偏大
圖5：接頭、引物殘留峰型圖
（紅色箭頭標(biāo)注為引物殘留，藍(lán)色箭頭標(biāo)注為接頭殘留）
圖9：過度擴(kuò)增峰型圖
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