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比例雙光束光度計(jì)廣泛應(yīng)用于教學(xué)和日常分析等需求。
比例雙光束光度計(jì)從光源發(fā)出的光分成兩束，分別經(jīng)過各自的單色器2、3后，得到波長(zhǎng)為λ1和λ2的兩束單色光。借切光器調(diào)制，這兩束光以定時(shí)間問隔交替照射裝有試樣溶液的吸收池。經(jīng)檢測(cè)器的光電轉(zhuǎn)換和電子控制系統(tǒng)的工作，在數(shù)字電壓表上顯示出λ1和λ2的透光差值△T，或是顯示兩者的吸光度差值△A。
根據(jù)朗伯-比爾定律，試樣溶液在兩個(gè)波長(zhǎng)λ1和λ2的吸光度的差值幽與溶液中待測(cè)物質(zhì)的濃度成比例。雙波長(zhǎng)分光光度法可將待測(cè)成分吸收光譜的任意波長(zhǎng)設(shè)為零點(diǎn)，測(cè)定它與任意其他波長(zhǎng)問的吸光度差值。
比例雙光束光度計(jì)具有下列優(yōu)點(diǎn)：
(1)因?yàn)閮H用個(gè)樣品池進(jìn)行測(cè)量，不需要用參比吸收池，故可消除參比池與樣品池的不同而引起的誤差，使分析精度提高數(shù)倍;
(2)對(duì)混濁樣品進(jìn)行測(cè)定時(shí)，可消除不同混濁度所引起的背景吸收，即基線的變化幾乎*被消除;
(3)適當(dāng)選擇波長(zhǎng)，可掩蔽共存組分的干擾，因此可簡(jiǎn)化混合組分同時(shí)測(cè)定的手續(xù)及數(shù)據(jù)處理，并可提高靈敏度和準(zhǔn)確度;
(4)由于背景吸收及其他干擾的消除，可測(cè)定微小光度，能檢測(cè)出0.01～0.005的消光度值;
(5)可應(yīng)用于薄層色譜及紙上色譜的定量分析，測(cè)定時(shí)可消除薄層厚度不均勻所引起的誤差，使測(cè)量基線平穩(wěn)。
但由于雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)光路結(jié)構(gòu)和電學(xué)線路較為復(fù)雜，儀器價(jià)格比較昂貴，目前國(guó)內(nèi)雙波長(zhǎng)儀器并不普遍。應(yīng)當(dāng)指出采用單波長(zhǎng)分光光度計(jì)進(jìn)行雙波長(zhǎng)分光光度法的定量分析也是可行的，只是選擇的參比波長(zhǎng)λ1和測(cè)定波長(zhǎng)λ2要適當(dāng)。
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