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在細胞培養(yǎng)，特別是傳代細胞培養(yǎng)中，支原體污染率達到15-35%。支原體的侵染會引起細胞功能和基因表達的嚴重改變，并造成持續(xù)危害。由于支原體污染會嚴重影響實驗結(jié)果的可靠性、重復性和一致性，對支原體的常規(guī)檢測非常重要。
傳統(tǒng)的支原體檢測方法很耗費時間，通常需要一天至數(shù)周，而且操作比較繁瑣，度不高。
中國藥典給定的支原體標準檢測方法有兩種：培養(yǎng)法和DNA染色法。培養(yǎng)法方法簡單，假陽性率低，但樣品需要量高，耗時20天左右，時間漫長。DNA染色法結(jié)果直觀，假陽性率低，但需要熒光顯微設(shè)備，實驗操作復雜。
能否找到一種省時、省力且性高的方法檢測支原體污染呢？
目前，市場上具有多款支原體快速檢測試劑盒，我們選取了其中兩種常見的品牌，就其檢測原理與操作進行一下比較。
一、美國CLARKBioscience品牌一步法檢測試劑盒
美國CLARKBioscience公司研發(fā)的一步法支原體檢測試劑盒One-stepQuickcolorMycoplasmaDetectionKit，利用等溫擴增的方法，可檢測7種常見支原體的基因。
該檢測方法與PCR方法類似，檢測過程中，只需取少量細胞培養(yǎng)上清，及一個能控制溫度的水浴鍋或恒溫金屬浴，其擴增產(chǎn)物的顏色可通過肉眼直接觀察判斷，整個過程需要1小時左右。
該方法對儀器的要求比較低，理論上靈敏度比較高。缺點在于檢測的支原體種類太少，目前已發(fā)現(xiàn)的近200種支原體，只能檢測其中的7種，檢測范圍太窄，也不符合國家藥典的規(guī)定。而且肉眼觀察結(jié)果比較主觀，如果實驗員剛好有色盲或色弱的問題，此種方法放棄。
二、美國Lonza品牌生物發(fā)光法檢測試劑盒
美國Lonza品牌的MycoAlertTM和升級的MycoAlertTMPLUS支原體檢測試劑盒，采用生物發(fā)光的方法，檢測支原體酶活性。其檢測的支原體酶廣泛存在于180多種支原體中，而不存在于真核細胞中。
該方法利用支原體酶的特定活性，進行選擇性的生物化學檢測。當支原體被溶解后，釋放的酶與支原體檢測試劑盒中提供的底物發(fā)生催化反應(yīng)，將ADP轉(zhuǎn)化成ATP，參與生物發(fā)光反應(yīng)，并可通過分光光度計測定。如果樣品添加底物后讀數(shù)上升，表明存在支原體污染。整個實驗過程需要20分鐘左右。
該方法能夠檢測的支原體種類比較全，檢測結(jié)果量化，容易判斷，耗時短。缺點是需要配置發(fā)光儀或多功能酶標儀，靈敏度也可能低于擴增法。
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