多色流式實(shí)驗(yàn)的意義

流式多色實(shí)驗(yàn)幫助研究者得到更精細(xì)的細(xì)胞分群和更精準(zhǔn)的細(xì)胞特性分析。鑒于多色流式在科研中應(yīng)用越來(lái)越廣泛，多色流式實(shí)驗(yàn)結(jié)果和機(jī)器的直接相關(guān)性和緊密性，我們必須充分了解流式細(xì)胞儀，根據(jù)流式細(xì)胞儀的性能參數(shù)，試劑特性，抗原表達(dá)特點(diǎn)，來(lái)設(shè)計(jì)符合實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡?流式實(shí)驗(yàn)方案，提高流式數(shù)據(jù)可靠性與準(zhǔn)確性。

BD流式細(xì)胞儀

BD FACSCanto™ 3激光10色		BD LSR Fortessa™ X-20 5激光18色
BD FACSVerse™ 3激光8色		三角和八角檢測(cè)器

1、機(jī)器試劑一站式解決方案第一步：充分了解流式細(xì)胞儀

流式細(xì)胞儀的狀態(tài)（Cytometer Performance）直接關(guān)系多色流式的結(jié)果，所以機(jī)器的日常維護(hù)和質(zhì)控是非常重要的。

Initial Setup of a Cytometer

Daily Workflow

讓我們先從解讀機(jī)器質(zhì)控報(bào)告 Cytometer Setup & Tracking（CST）Report 開(kāi)始了解機(jī)器。

  • rSDEN：Robust standard deviation of electronic noise ；
  • Qr：Relative detection efficiency for each detector；
  • Br：Relative optical background；
  • rCV：Robust coefficient of variation for each setup bead；

Cytometer Performance-CS&T

2. 機(jī)器試劑一站式解決方案第二步：不能不了解的參數(shù)

分辨率（Resolution）：衡量流式細(xì)胞儀區(qū)分弱染色信號(hào)和未染色信號(hào)程度的參數(shù)

染色指數(shù)（Stain Index）：不同熒光標(biāo)記抗體在特定機(jī)器上分辨率的度量標(biāo)準(zhǔn)

3. 機(jī)器試劑一站式解決方案第三步：設(shè)計(jì)panel，優(yōu)化panel

人外周血8色T細(xì)胞Panel設(shè)計(jì)

   流式細(xì)胞儀：BD canto II 4 Blue-2 Red-2 Violet
   檢測(cè)指標(biāo)： CD3 CD4 CD8 CD25 CD127 CD45RA CD27 CCR7

Panel優(yōu)化前后對(duì)比：

BD HorizonTM 新熒光

BD HorizonTM Brilliant Blue 515:
點(diǎn)亮您的藍(lán)激光，F(xiàn)ITC 通道的最佳替代染料
亮度約是FITC 的7 倍，和PE 通道有更小的溢漏

BD HorizonTM PE-CF594:
以亮度上的絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，可替代PE-Texas Red® /ECD/PE-Alexa Fluor® 610

BD HorizonTM Brilliant Violet 家族:
讓您的紫激光充分運(yùn)行起來(lái)
BV421 BV510 BV605 BV650 BV711 BV786 BV421
比PE 更亮，弱表達(dá)抗原的第一選擇，可替代BD HorizonTM V450, eFluor450,Pacific BlueTM

BD HorizonTM Brilliant UltraViolet :
355 激光管的新選擇
BUV395 BUV496 BUV661 BUV737 BUV805