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不同實(shí)驗(yàn)中 transwell 小室的選擇和使用

來源:北京眾仁鑫商貿(mào)有限公司   2021年11月02日 11:19  

Transwell 小室在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中很常用,共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)、趨化實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲以及藥物轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)都會(huì)用到,但小室的規(guī)格有很多種,不同的實(shí)驗(yàn)需要用到的小室規(guī)格也不同。

根據(jù) transwell 板的不同,transwell 小室可以分為 6 孔板小室、12 孔板小室和 24 孔板小室以及和 transwell 皿配套的 75 mm 直徑的小室;根據(jù)孔徑的不同,從小孔徑到大孔徑又分為 0.4μm 規(guī)格、3μm 規(guī)格、5μm 規(guī)格、8μm 規(guī)格,不同實(shí)驗(yàn)對(duì)小室孔徑的要求也不一樣。


小于 3μm 孔徑的小室,細(xì)胞不會(huì)遷移通過,研究不涉及細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力,不需要細(xì)胞穿過聚碳酸酯膜,應(yīng)該選擇 3μm 以下的孔徑。例如共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)和 caco-2 細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)模型實(shí)驗(yàn)。


共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn):常用 0.4、34μm,將細(xì)胞 A 種于上室,細(xì)胞 B 種于下室,可以研究細(xì)胞 B 分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對(duì)細(xì)胞 A 的影響。


caco-2 細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)模型:選用 0.44μm 膜,將 Caco-2 細(xì)胞以約 l×10 個(gè)/mL,每孔 0.5 mL 的密度接種在 Transwell 內(nèi)培養(yǎng) 21d 左右,前 1 周隔天換液,1 周后每天換液。在模型 建立的同時(shí)對(duì)其跨膜電阻值及堿性磷酸酶活性進(jìn)行監(jiān)測來判斷模型是否達(dá)到轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)要求。


涉及到細(xì)胞遷移的實(shí)驗(yàn):要用 5.0、8.0、12.0μm 的小室,這樣上室細(xì)胞可穿過聚碳酸酯膜進(jìn)入下室,計(jì)數(shù)進(jìn)入下室的細(xì)胞量可反映細(xì)胞的趨化能力、遷移能力和侵襲能力。


趨化性實(shí)驗(yàn):細(xì)胞 B 對(duì)細(xì)胞 A 的趨化作用,將細(xì)胞 A 種于上室,細(xì)胞 B 種于下室,可以研究細(xì)胞 B 分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對(duì)細(xì)胞 A 的趨化作用;趨化因子對(duì)細(xì)胞的趨化作用,將細(xì)胞種于上室,下室加入某種趨化因子,可研究該趨化因子對(duì)細(xì)胞的趨化作用。


細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn):常用 8.0、12.0μm 膜,上室種細(xì)胞,下室加入 FBS 或某些特定的趨化因子,細(xì)胞會(huì)向營養(yǎng)成分高的下室跑,計(jì)數(shù)進(jìn)入下室的細(xì)胞量可反映細(xì)胞的遷移能力。


細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn):常用 8.0、12.0μm 膜,原理與細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)類似。上室種細(xì)胞,下室加入 FBS 或某些特定的趨化因子,細(xì)胞會(huì)向營養(yǎng)成分高的下室跑,但與細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)不同的是,聚碳酸酯膜上室側(cè)鋪上一層基質(zhì)膠,用以模仿體內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì),細(xì)胞欲進(jìn)入下室,先要分泌基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)將基質(zhì)膠降解,方可通過聚碳酸酯膜。計(jì)數(shù)進(jìn)入下室的細(xì)胞量可反映細(xì)胞的侵襲能力


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