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在HPLC中高效液相色譜儀原理是什么?

來源:成都彼樣生物科技有限公司   2021年11月05日 09:40  
 高效液相色譜儀是一種常用的色譜儀產(chǎn)品,主要由儲液器、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成,被廣泛用于多個領域中。那么高效液相色譜儀原理是什么?是依靠什么原理工作的?

  高效液相色譜儀原理

  分配系數(shù)與組分、流動相和固定相的熱力學性質(zhì)有關(guān),也與溫度、壓力有關(guān)。在不同的色譜分離機制中,K有不同的概念:吸附色譜法為吸附系數(shù),離子交換色譜法為選擇性系數(shù) (或稱交換系數(shù)),凝膠色譜法為滲透參數(shù)。但一般情況可用分配系數(shù)來表示。
  在條件(流動相、固定相、溫度和壓力等)一定,樣品濃度很低時(Cs、Cm很小)時,K只取決于組分的性質(zhì),而與濃度無關(guān)。這只是理想狀態(tài)下的色譜條件,在這種條件下,得到的色譜峰為正常峰;在許多情況下,隨著濃度的增大,K減小,這時色譜峰為拖尾峰;而有時隨著溶質(zhì)濃度增大,K也增大,這時色譜峰為前延峰。因此,只有盡可能減少進樣量,使組分在柱內(nèi)濃度降低,K恒定時,才能獲得正常峰。
  在同一色譜條件下,樣品中K值大的組分在固定相中滯留時間長,后流出色譜柱;K值小的組分則滯留時間短,先流出色譜柱?;旌衔镏懈鹘M分的分配系數(shù)相差越大,越容易分離,因此混合物中各組分的分配系數(shù)不同是色譜分離的前提。
  在HPLC中,固定相確定后,K主要受流動相的性質(zhì)影響。實踐中主要靠調(diào)整流動相的組成配比及pH值,以獲得組分間的分配系數(shù)差異及適宜的保留時間,達到分離的目的


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