人紅白血病細胞培養(yǎng)及凍存操作

來源：武漢尚恩生物技術有限公司 2021年11月09日 13:47

　　人紅白血病細胞培養(yǎng)操作：

　　1.換液周期2-3天；

　　2.培養(yǎng)基體積T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml；

　　3.傳代比例1:2-1:4(具體情況視細胞生長速度及密度決定)；

　　4.傳代方法1.混勻細胞，收集細胞培養(yǎng)基，900rpm離心3-5min，棄上清；

　　5.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；

　　6.補足*培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。

　　注意事項：懸浮細胞會附著瓶底，輕輕晃動培養(yǎng)基或者吹打細胞面就會脫落，不需要胰酶消化。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng)，更適合吹打細胞操作，吹打細胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。

　　人紅白血病細胞凍存操作：

　　1.凍存液配方92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);

　　2.凍存規(guī)格200-300萬/ml，1ml每管。

　　凍存方法：

　　1.消化并離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；

　　2.將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管；

　　3.將凍存管轉入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉入-80度過夜，第二天轉入液氮保存。

　　注意事項：凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方案。

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